104 实验六 真核细胞基因组提取.ppt

第1页：实验七DNA的纯化与鉴定

实验七DNA的纯化与鉴定

第2页：一、实验目的

• 一．实验目的及背景
• 在生物技术实验中，我们粗提取的ＤＮＡ需分离纯化去处蛋白质等杂质，我们都需要将最终的结果在琼脂糖凝胶，或ＰＡＧＥ凝胶上走电泳观察，以判断我们实验的正确性以及DNA片段的完整性。同时通过紫外分光光度计测定OD260,OD280的吸收值，以确定DNA的浓度和纯度。
• 核酸经凝胶电泳后，在ＥＢ（溴化乙锭）中浸染，核酸分子与溴化乙锭结合后，能吸收300-360mm波长的紫外光，同时诱发出液长为５９０nm的红橙色荧光，从而可通过照像机摄影，凝胶成像系统记录实验结果。DNA浓度的计算根据郎伯-比尔定理（E=abc）计算。根据经验1OD260=0.05ug/ulDNA。DNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间，低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。

第3页：二.实验试剂及器材

• 二.实验试剂及器材
• 酚：氯仿：异戊醇（25：２４：１）
• ７０％乙醇ＴＥbuffer
• RNase
• 琼脂糖
• TBE电泳缓冲液
• 电泳设备
• 紫外分光光度计
• 凝胶成像系统

第4页：实验加样表

三．实验方法 1.加入RNase至终浓度１０μg/ul３７℃反应１小时。 2.加入酚：氯仿：异戊醇（２５：２４：１）等体积各抽提2-3次，取上清。 3.加入１/10倍体积３MNaAc(pH5.2)，２倍体积无水乙醇混匀，－２０℃下10min-30min。 4.15000rpm，离心10分钟。 5.ＤＮＡ沉淀用７０％乙醇洗２次，３７℃烘干ＤＮＡ（无乙醇）。 6.１００μl TE buffer溶解沉淀。

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第5页：7取20ulDNA母液稀释至1000μl

• 7取20ulDNA母液稀释至1000μl，在紫外分光光度计上测OD260,OD280。
• 8.取10ulDNA,在0.8％琼脂糖凝胶120伏，1-2小时电泳，
• 9.在凝胶成像系统上记录和分析结果。

第6页：四、实验结果

• 四．结果与分析
• 1．计算ＤＮＡ的得率和纯度
• 2．记录电泳结果，并估算所提ＤＮＡ的分子量。

第7页：四、实验结果

• 四．结果分析
• 1.为了获得较为完整的基因组ＤＮＡ在实验中应注意什么问题？