页数：9页文件大小：124.0 KB来源： 现代生物学实验ppt课件
本课件为《现代生物学实验》的分子生物学部分开发实验植物遗传亲缘关系研究部分，重点展开分子生物学部分开发实验植物遗传亲缘关系研等内容，并说明目的要求、原理、试剂器材、操作步骤与注意事项，便于课前预习和实验现场对照操作。
分子生物学部分开发实验植物遗传亲缘关系研究
实验目的运用PCR-RAPD分子标记技术，对不同种植物的基因组DNA进行PCR扩增，获得指纹图谱。同时运用统计分析方法，计算不同物种的遗传距离，得出物种间的亲缘关系。
实验材料植物样品:花椰菜1，花椰菜2，花椰菜3
实验试剂及仪器10×buffer:500mMKCl100mMTris-HCl(pH9.0)0.1%明胶1%TritonX-100MgCl22.5mM４×dNTP:1mM引物：3种RAPD引物5.0uM模板：20ng/μlTaq酶：5u/μlPCR仪，凝胶成像系统，电泳系统
实验方法１．向无菌的500μlEppendorf管中依次加入以下溶液。反应物体积10×buffer2.5μl4×dNTP(1mM)2.5μlMgCl2(25mM)2.5μl无菌水10.5μlTaq酶(1U/ul)1μl引物2μl模板DNA(20ng)4μl总体积25μl
2．反应体系混匀，离心3．在ＰＣＲ仪上按以下方式循环94℃变性１分钟36℃退火１分钟72℃延伸２分钟经过40个循环4．７２℃延伸反应7分钟。5．取20μl反应液加4μlLoadingbuffer在6.1.5％琼脂糖凝胶上120伏，电泳2小时。7.在凝胶成像系统上观察记录实验结
根据RAPD扩增结果计算:1.遗传相似性系数SS=2Nxy/(Nx+Ny)Nxy为种间共有的扩增带，Nx为X种具有的扩增带，Ny为Y种具有的扩增带2.遗传距离（D）D=1－S结果分析
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