81 实验三 培养组织的观察.ppt

第1页：实验三培养组织的观察

实验三培养组织的观察

第2页：实验器材倒置相差显微镜

实验器材倒置相差显微镜、显微摄影装置

第3页：在培养5～6d后

在培养5～6d后，把培养瓶置于倒置相差显微镜下观察，可见有细胞从组织块周边生长，呈放射状排列。实验步骤:

第4页：注意事项组织培养中常见的污染物有细菌

注意事项组织培养中常见的污染物有细菌、酵母菌、真菌和支原体，其来源或由培养物自身携带或由培养物以外的环境污染。微生物污染培养细胞的特征主要有：1.培养液的酸碱度发生异常的改变，大多数情况下培养液的PH下降；2.培养液呈现混淆状，有时在培养液的面上出现薄膜或泡沫，或者出现许多微小点子，当摇动培养瓶时则散开；3.光镜（100倍）观察，在细菌感染后，在细胞间的空隙出现有颗粒，有较小形的出牙颗粒。真菌感染则可见许多细丝状菌丝，有时还密集有集群孢子。

第5页：培养细胞的生长和增殖：游离期

培养细胞的生长和增殖：游离期：细胞接种后从悬浮状态到细胞贴瓶；生长期：指数生长期，可用细胞分裂指数即每千个细胞的分裂细胞数来表示，一般情况为0.2-0.5%。停止期：细胞密度已饱和，细胞停止增殖，但代谢活动仍在进行。

第6页：培养结果的检测一、组织细胞的分型

• 培养结果的检测一、组织细胞的分型：根据细胞与容器之间是否相贴可把培养细胞分为贴附型和悬浮型。多数细胞属于贴附型，贴附在培养瓶壁上生长，常失去原有形态而出现类似于“返祖”的现象，大致有如下几种：1.成纤维细胞型：与体内成纤维细胞的形态相似，胞体呈梭形或不规则
• ，核卵圆形，胞质外伸2～3个突起。细胞生长呈放射状、火焰状或漩涡状走行。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞核血管内皮常呈本型。在营养状况不良的情况下培养出来的其他类型细胞也会转成本型。

第7页：上皮细胞型：扁平不规则多角形

2.上皮细胞型：扁平不规则多角形，核圆居中。细胞彼此紧密相连成单层膜，生长时呈膜状移动，膜边缘的细胞很少脱离细胞群单独活动。起源于内、外胚层的细胞呈此型，如表皮及其衍生物、消化管上皮、肝、胰和肺泡上皮。3.游走细胞型：分散生长，一般不连成片。细胞质常伸出伪足和突起，能作为游走和变形运动，其运动速度快而不规则。4.多型细胞型：有的细胞难以确定形态特点，可归为此型，如神经组织的细胞。

第8页：二、培养细胞的生长和繁殖细胞“一代”的生长和

二、培养细胞的生长和繁殖细胞“一代”的生长和繁殖过程要经过三个阶段：第一阶段为游离期，细胞接种后从悬浮状态到细胞贴瓶。第二阶段为生长期，即指数增生期。这是细胞增殖旺盛阶段，细胞分裂相多。组织块培养的细胞生长从组织块四周开始，当细胞分裂，数量增多则形成生长晕(细胞培养5～6天后，把培养瓶置于倒置相差显微镜下观察，可见到有细胞从组织块周边生长，呈放射状排列，称为生长晕)。生长晕的大小与细胞增殖相关。数天后细胞连接成片，细胞间发生接触抑制而停止扩展运动。第三阶段为停止期（平顶期），细胞密度已饱和，细胞停止增殖，但代谢活动仍在进行。此时要及时分离、传代，以免影响下一代细胞的机能状态。