第1页：实验八细菌的鉴定（BBL半自动鉴定系统）一、教
实验八细菌的鉴定（BBL半自动鉴定系统）
一、教学要求了解不同的微生物快速鉴定方法及应用初步掌握细菌自动鉴定系统（BBL CRYSTAL）的操作技术
二、实验原理1、Miniaturized Biochemical AssaysBacteria can be identified by specific biochemicalproducts they produce during growth.Biochemical and enzymatic reactionsMiniaturized biochemical assays test for these specificproducts
第2页：API-IdentificationKi
API-Identification KitsGram-negative bacteriaStaphylococci
第3页：2、Immunoassays
- 2、Immunoassays
- 血清学反应（Serological reactions）Agglutination reactions、Precipitation reactions
- 免疫标记（immunolabel)Radioimmunoassays (RIA)Fluorescent immunoassays (FIA)Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA)Chemiluminesent Immunoassay(CLIA)、Time-resolved fluorescent immunoassays（TRFIA）Immunogold labelling
第4页：ELISA（enzymelinkedim
- ELISA（enzyme linked immunosorbentassay）TheELISAcanbeusedtodetectthepresenceofantigensthatarerecognizedbyanantibody,oritcanbeusedtotestforantibodiesthatrecognizeanantigen.
- Sandwich ELISA
第5页：Immunogoldlabellingt
- Immunogold labelling techiques
- 斑点免疫金渗滤法
- 胶体金标记免疫层析法
第6页：
第7页：3、Nucleicacidbasedassay
- 3、Nucleic acid based assay
- DNA hybridization–followed by detection with
- Dot blot assay
- Fluorescence or Chemiluminesence
- Polymerase Chain Reaction (PCR)–followed by detection with
- Gel electrophoresis
- Fluorescence or Chemiluminesence
- New assay formats under development
第8页：AutomatedIdentificat
- Automated Identification Systems
- VITEK系列全自动微生物分析系统（biosMerieumx）
- BBL CrystalTM半自动/自动细菌鉴定系统（BD）鉴定板，比浊仪，微生物鉴定专家数据分析系统，自动判读仪(Autoreader)
第9页：鉴定版（6类）NH奈瑟氏/嗜血杆菌
1、鉴定版（6类）NH奈瑟氏/嗜血杆菌3.0麦氏浊度35～37℃孵育4小时GP革兰氏阳性菌0.5麦氏浊度35～37℃孵育18～24小时RGP快速革兰氏阳性菌2.0麦氏浊度35～37℃孵育4小时ANR厌氧菌4.0-5.0麦氏浊度35～37℃孵育4小时ENF肠/非发酵菌0.5麦氏浊度35～37℃孵育18～20小时RSE快速粪/肠菌0.5-1.0麦氏浊度35～37℃孵育3小时
第10页：三材料与器材
- 三材料与器材
- 菌种：待测的分纯菌株
- 试剂：无菌水，液体石腊，灭菌滴管等
- API 20 E系统
第11页：四操作步骤(BBLCRYSTAL
四操作步骤(BBL CRYSTAL—细菌自动鉴定系统)1、配制菌液挑取单个菌落，在肉汤管（厂商已提供）中混匀，调节好菌液浓度（0.5-1.0麦氏浊度）。2、接种取出盛液盒,配制好的菌悬液直接倒入头部，轻轻地来回颠倒盛液盒，使菌液均匀充满每一孔，并让多余的菌液回到头部。撕开鉴定板的密封包装，鉴定板，其泡沫部位对应盛液盒的头部，均匀下压，使鉴定板和盛液盒合紧。3、培养翻转鉴定板（标签向下）放鉴定板入配套托盘内，放入非CO235-37OC，湿度40-60%的孵育箱孵育3.0h。
第12页：4、读板按时取出鉴定板，立刻判读结果
- 4、读板按时取出鉴定板，立刻判读结果。如果暂时无法判读结果。放鉴定板于2～8℃冰箱。尽早判读。注意事项：
- 应使用新鲜菌落（菌龄小于24小时）
- 使用单个菌落配制菌悬液。90%以上的鉴定错误或无鉴定结果是由细菌不纯引起。
- 不同的鉴定板需配置特定的菌液浓度。
- 鉴定板起封后，1小时内使用。
- 已装有标本的检测板5分钟内放入孵育箱。
- 检测板孵育时，重叠不超过两层。
- 孵育完成需尽快将鉴定板从温箱中取出，不能超过规定孵育时间。（可提前不能延后）。
- 及时读板，否则放入冰箱。
- 每种鉴定板只能鉴定其菌种库中包含的细菌种类。所以选择鉴定板前，请仔细阅读各鉴定板的鉴定菌种库。
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第14页：五注意事项配制菌悬液时一定要按操作要求调节好浓度
五注意事项配制菌悬液时一定要按操作要求调节好浓度。六思考题采用细菌自动鉴定系统（BBL CRYSTAL）进行细菌鉴定有何优缺点？
