07 实验二 不良环境对植物细胞膜的伤害.doc

第1页：实验二 原理与材料用具

实验二 原理与材料用具：实验二不良环境对植物细胞膜的伤害一、原理植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染）危害时，细胞膜的结构和功能首先受到伤害，细胞膜透性增大。若将受伤害的组织浸入无离子水中，其外渗液中电解质的含量比正常组织外渗液中含量增加，组织受伤害越严重，电解质含量增加越多。用电导仪测定外渗液电导率的变化，可反映出质膜受伤害的程度。在电解质外渗透的同时，细胞内可溶性有机物也随之渗出，引起外渗液可溶性糖、氨基酸、核苷酸等含量增加，氨基酸和核苷酸对紫外光有吸收，对紫外分光光度计测定受伤害组织外渗液消光值，同样可反映出质膜受伤害的程度。用电导仪法和紫外法测定结果有很好的一致性。二、材料与仪器设备。

• 仪器设备⑴DDS—11A型电导仪法；⑵751—型紫外分光光度计；⑶真空泵；⑷真空干燥器；⑸三用水浴；⑹打孔器⑺剪刀；⑻洗瓶；⑼试管；⑽移液管；⑾玻棒；⑿滤纸
• 试剂去离子水
• 材料低温处理过的黄瓜、番茄三、方法步骤
• 清洗器具：由于电导仪变化非常灵敏，稍有杂质即产生很大误差。因此所用玻璃器具均需先用热肥皂水洗，再用洗液洗涤，然后用自来水、无离子水各冲四到五遍（最好是容器口朝下用水冲）。向洗净的试管中加入去离子水，用电导仪测定电导值，检查试管是否确实冼净
• 取样及处理选取果品，一份放入适温下贮藏，另一份放入过低温度下使其受冷害，作为处理。用打孔器及切片器将样品制成厚薄均匀，大小一致的组织圆片，精确称取2克（或10个圆片），放入试管内，用去离子水冲洗三次，然后加入30ml去离子水。对照和处理均设3~4个重复。将试管放入真空干燥器内，开动真空泵抽气10min，以抽出细胞间隙空气。缓慢放入空气，水即渗入细胞间隙，组织圆片变成透明状，细胞内溶质易于渗出，取出试管，间隔几分钟振荡一次，在室温下保持30min
• 测定：将DDS—11A型电导仪电极插入试管，测定外渗液的电导值。测定之后，将试管放入水浴锅沸水中5min以杀死组织。待冷至室温后，再次测定外渗液的电导值
• 计算：1以细胞膜相对透性大小表示细胞受害的程度。通常按下式计算：细胞膜相对透性（%）=L1/L2×100式中：L1：组织杀死前外渗液的电导值；L2组织杀死后外渗液的电导值。2直接计算细胞膜伤害率，通常采用下式计算：式中：C1：对照组织杀死前外渗液的电导值；C2：对照组织杀死后外渗液的电导值；T1：处理组织杀死前外渗液的电导值；T2处理组织杀死后外渗液的电导值

第2页：测定步骤与注意事项

附电导仪使用方法：1将电极引线接到仪器相应接线柱上

2接上稳压器，接通电源，打开电源开关

3将开关拨向“校正”位置，调整调节器，使指针达到满偏

4将开关拨向“测定”位置

指针应回到0点

5拨动选择测定范围旋钮，使其处于测定范围之内，如不知测量范围，应先放在最大量程位置上，由大到小逐级调整

6将电极用量蒸馏水冲洗干净，并用滤纸吸去附着的水分

放在需测组织提取液中，待指针稳定后，读出指针所指数值，此数值即该提取液的电导度

7按上述方法测定组织圆片杀死后提取液电导度

8将电极用蒸馏水冲洗干净，放在水中，如长期不用，则应将电极洗净晾干包装收藏

注意事项：电导率测定的整个过程均需在恒温下进行，因为温度不仅影响细胞内离子内外渗透速度，而且影响提取的电导率，一般每升高1℃，电导率约增加2%，通常以25℃为标准温度，如不在25℃下测定，则要求把电导率换算为标准温度25℃的电导率