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10 Vitamin.ppt

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本课件讲授维生素的测定:先说明维生素 A 与 β-胡萝卜素在 440 nm 与 620 nm 双波长下的吸光度校正与定量,随后给出硫胺素硫色素荧光法、核黄素荧光法、烟酸溴化氰开环比色法,以及还原型维生素 C 的 2,6-二氯靛酚滴定法。

维生素章节开篇页,标示本章进入维生素 A 的结构与性质
β-胡萝卜素结构页,源文件仅给出名称,结构细节待对照原图
维生素 A 与 β-胡萝卜素测定页,源文件仅给出标题,测定流程待对照原图
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第1页:维生素 A

本页为维生素章节开篇,标示本章进入维生素 A(Vitamin A)的结构与性质。

第2页:β-胡萝卜素

本页主题为 β-胡萝卜素(β-Carotene),源文件仅给出名称,其双键与紫罗兰酮环结构建议对照原课件图片补充。

第3页:维生素 A 与 β-胡萝卜素的测定

本页主题为维生素 A 与 β-胡萝卜素的测定,源文件仅给出标题,测定流程建议对照原课件图片补充。

第4页:β-胡萝卜素标准曲线

β-胡萝卜素标准品的吸光度分别在 440 nm 与 620 nm 两个波长下测定,据此建立两条标准曲线用于分别定量胡萝卜素与维生素 A。

第5页:胡萝卜素与维生素 A 的吸光度换算

先利用 440 nm 处的吸光度,将其换算到 620 nm 处的贡献并从 620 nm 总吸光度中扣除,所得的差值即为维生素 A 在 620 nm 处的吸光度。

  • 胡萝卜素(mg/ml):由 440 nm 吸光度求得。
  • 维生素 A(mg/比色皿,样品):由 620 nm 处的校正吸光度求得。

第6页:硫胺素的测定

硫胺素(维生素 B₁)由嘧啶环与噻唑环构成;测定时将其氧化为硫色素(thiochrome),在 365 nm 激发、于 435 nm 测定荧光。

第7页:食品中硫胺素测定的前处理

  1. 取 5 g 强化面粉。
  2. 加 75 ml 0.1 N 盐酸。
  3. 定容至 100 ml。
  4. 100 ℃ 消化 30 分钟。
  5. 离心并过滤。

第8页:硫胺素的氧化测定操作

硫胺素氧化测定的加液方案(样品管与标准管)
管号样品/标准液NaCl氧化剂/碱异丁醇后处理
管 1(样品)5 ml 样品2.5 g3 ml K₃FeCN₆13 ml离心
管 2(样品空白)5 ml 样品2.5 g3 ml NaOH13 ml离心
管 3(标准)5 ml 硫胺素标准液2.5 g3 ml K₃FeCN₆13 ml离心
管 4(标准空白)5 ml 硫胺素标准液2.5 g3 ml NaOH13 ml离心

硫胺素标准溶液浓度 = 0.2 mg/ml。

计算:B₁(mg / 5 ml 测定样品)=(管 1 − 管 2)÷(管 3 − 管 4)。

第9页:核黄素的结构

核黄素(维生素 B₂):6,7-二甲基-9-D-1-核糖醇基异咯嗪(6,7 Dimethyl-9-D-1-Ribitylisoalloxazine)。

第10页:核黄素的荧光测定法

  1. 在 0.1 N 盐酸中高压灭菌 30 分钟。
  2. 调节 pH 至等电点使蛋白质沉淀。
  3. 过滤。
  4. 测定:取 10 ml 样品,加入 1 ml 核黄素标准液或 1 ml 水、1 ml 乙酸、0.5 ml 4% 高锰酸钾、0.5 ml 3% 过氧化氢(高锰酸钾颜色应在 10 秒内消失),再加 20 mg 粉末状 Na₂S₂O₄。
  5. 计算最终样品溶液中核黄素的 mg/ml。

第11页:烟酸

本页标示进入烟酸(Niacin)的测定内容。

第12页:烟酸的测定步骤

  1. 消化与水解。
  2. 用硫酸铵沉淀蛋白质。
  3. 离心并过滤。
  4. 用 CNBr(溴化氰)使吡啶环开裂。
  5. 与对氨基苯磺酸显色。
  6. 在 470 nm 测定吸收。
  7. 绘制烟酸浓度-吸光度标准曲线。
  8. 拟合最佳直线。

第13页:烟酸与溴化氰的开环反应

烟酸与溴化氰(CNBr)加成后发生重排,吡啶环被打开并生成重排衍生物,该反应是烟酸比色测定的显色基础。

第14页:烟酸的标准曲线

以 470 nm 处的吸光度为纵轴、烟酸微克数为横轴建立标准曲线,用于样品中烟酸的定量。

第15页:维生素 C 的结构

维生素 C
抗坏血酸(Ascorbic Acid)与脱氢抗坏血酸(Dehydroascorbic Acid)互变。
还原剂
2,3-二巯基丙醇类化合物 HSCH₂CH₂(SH)CH₂OH 可把脱氢抗坏血酸还原为抗坏血酸。

第16页:还原型维生素 C 的滴定法

  1. 用偏磷酸(HPO₃)-乙酸溶液提取。
  2. 用 2,6-二氯靛酚(蓝色)滴定;终点时呈玫瑰粉红色(酸性条件下 2,6-二氯靛酚的颜色)。

第17页:还原型维生素 C 的计算

A
滴定样品所消耗的 2,6-二氯靛酚毫升数。
B
空白滴定所消耗的毫升数。
F
1 ml 靛酚标准溶液相当于抗坏血酸的毫克数。
V
初始测定液体积。
E
样品克数。
X
滴定时所取样品分取液体积。

按上述参数代入即可计算样品中还原型维生素 C 的含量。

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