15 第15章 厌氧菌.pptx

第1页：厌氧菌

第十五章厌氧菌

第2页：概述厌氧性细菌

第一节概述厌氧性细菌(anaerobic bacteria)指一群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长繁殖的细菌。

第3页：厌氧菌的分类

厌氧菌的分类分为两类

一类为有芽胞厌氧菌，只有一个属，即梭菌属，共有130个种，以芽胞形式存于体外。另一类为无芽胞厌氧菌，包括40多个属，300多个菌种和亚种；多为体内正常菌群，存在于皮肤、口腔、上呼吸道、肠道和泌尿生殖道。易引起这些部位的内源性感染。

第4页：厌氧菌感染的条件局部组织的氧化还原电等

厌氧菌感染的条件局部组织的氧化还原电势降低

如血管损伤、烧伤、动脉硬化、肿瘤压迫、组织坏死等，可造成局部组织的缺血、缺氧等。皮肤黏膜屏障被破坏：如大面积外伤伴有需氧菌感染，为厌氧菌感染提供了条件。机体免疫功能下降：如接受免疫抑制剂、放疗或化疗的患者；糖尿病、慢性肝、肾疾病及老人、婴幼儿、早产儿等。菌群失调：长期或大量应用广谱抗菌药物无效的患者，均可诱发厌氧菌感染。

第5页：厌氧菌感染的临床特征局部有气体产生为等

厌氧菌感染的临床特征局部有气体产生为重要指征之一发生在黏膜附近的感染深部外伤如枪伤、人或动物咬伤后的继发感染分泌物有恶臭或暗红血色或在紫外光下发出红色荧光，或脓汁中有硫磺颗粒即为放线菌感染某些抗生素治疗无效的感染革兰染色着色不均、形态奇特、呈明显多形性；或镜检见细菌而需氧培养为阴性者。

第6页：厌氧菌的检验标本的采集与运送是否适当

第二节厌氧菌的检验标本的采集与运送是否适当，对厌氧菌培养能否成功至关重要。临床在进行厌氧菌培养前应与实验室联系，以便实验室做好接种培养的准备。须注意两点：①标本不能被正常菌群所污染；②应尽量避免接触空气。某些标本不适合做厌氧菌培养：如鼻咽拭子、痰液、流出的脓液、阴道分泌物、粪便等。

第7页：标本的检查方法实验室收到标本应在20等

标本的检查方法实验室收到标本应在20～30min内处理完毕，最迟不超过2h。如不能及时接种，应将标本保存于室温（冷藏对厌氧菌有害）。直接检查：实验室收到标本应仔细观察其性状，包括气味、是否脓性、带血或黑色坏死组织、硫磺样颗粒及紫外灯下有无荧光等。除血液外，各种标本均须直接涂片作革兰染色镜检，发现染色不均，形态奇特者常为厌氧菌的表现。

第8页：菌名革兰染色形态及其他特征脆弱类杆菌G等

菌名革兰染色形态及其他特征脆弱类杆菌G等

说明：本页原文为压平文本，表格按原文分类标签与次序整理，建议对照原课件图片核对表头与条目后入库。

第9页：标本的分离培养初代培养

标本的分离培养初代培养

• ：1.尽量使用新鲜培养基，2～4ｈ内用完
• ；2.使用前放入无氧环境，预还原处理24～48ｈ
• ；3.也可采用预还原灭菌法制备的培养基
• ；4.液体培养基应煮沸10min，驱除溶解氧，并迅速冷却，立即接种。

第10页：培养基的选择根据镜检结果选择合适的培等

培养基的选择根据镜检结果选择合适的培养基，常用的有非选择性和选择性培养基两种。非选择培养基：以牛心脑浸液及布氏肉汤为基础，补充0.5%酵母浸出液，5μg/ml氯化血红素、10 μg/ml维生素K1及5%~10%的脱纤维血的强化血平板。几乎能培养出所有的厌氧菌。

第11页：培养基的选择常用的选择培养基

培养基的选择常用的选择培养基

1.七叶苷胆汁平板（BBE）用于脆脆弱类杆菌2.卡那万古冻溶血平板（KVLB）可抑制大多数兼性厌氧菌，使产黑色素普雷沃菌早期产生黑色素3.FS培养基梭杆菌选择培养基4.VS培养基韦荣球菌选择培养基5.CCFA培养基艰难梭菌选择培养基6.卵黄平板（EYA）和兔血平板产气荚膜梭菌

第12页：标本的接种初代培养应同时接种固体

、液体两种培养基，且每份标本应同时接种3个平板，分别置有氧、无氧和含5~10%CO2环境培养。为了便于在混合培养物中发现厌氧菌，一般将标本分3区划线接种于平板上，在1、2区交界处，贴一张含5μg/片的甲硝唑纸片，如纸片周围出现抑菌圈，表明有厌氧菌存在。

第13页：培养方法通过物理

培养方法通过物理

• ：1.厌氧罐法2.气袋法3.厌氧手套箱4.厌氧工作站

第14页：结果观察厌氧菌的初代培养生长较慢

结果观察厌氧菌的初代培养生长较慢

• ：1.厌氧菌在对数生长期对氧非常敏感，故在培养的48ｈ内不应使细菌暴露于空气中2.标本镜检阳性，但培养48ｈ却无菌生长，应继续培养5～7ｄ。

第15页：次代培养和厌氧菌的确定初代厌氧培养有等

次代培养和厌氧菌的确定初代厌氧培养有细菌生长时，必须做耐氧试验以确定是否为厌氧菌。方法：从每个平板上挑取4~5个不同性状的菌落，每个菌落分别接种3个平板（每个平板分4~6个区，可同时做4~6个菌落的次代培养）。分别放有氧、无氧和含5%~10%CO2环境中培养48ｈ，如只在厌氧环境中生长的细菌，即为厌氧菌。

第16页：鉴定试验形态与染色

鉴定试验形态与染色

不仅能反映各种厌氧菌的特殊形态，同时也为鉴定厌氧菌提供参考依据。菌落性状：包括其形态、大小、色素、荧光及溶血等快速鉴定：其原理是依据细菌在代谢过程中所产生的胞外酶与少量生化基质迅速反应，能在4小时观察结果，无需在厌氧环境下培养，只需用浓菌液即可。其他：气液相色谱、PCR和基因探针等方法。

第17页：厌氧球菌厌氧性球菌

第三节厌氧球菌厌氧性球菌(Anaerobic cocci)是临床厌氧感染的重要病原菌，约占临床厌氧菌分离株的25％主要包括革兰阳性:消化球菌属消化链球菌属革兰阴性:韦荣球菌属

第18页：消化球菌属黑色消化球菌

(Peptococcus niger)是消化球菌属中唯一的菌种。革兰阳性球菌。直径0.3～1.3μm，单个、成双、短链或成堆排列。无芽胞，无荚膜。专性厌氧菌，生长缓慢，厌氧培养2～4天形成黑色不溶血的小菌落。标本黑色有臭味是该细菌感染的重要特点。

第19页：消化链球菌属代表菌为厌氧消化链球菌

（P.anaerobius）革兰阳性球形或卵圆形，大小不等，菌体直径0.3～1μm，常成双或呈短链状排列。无鞭毛，无芽胞，无荚膜。

第20页：消化链球菌培养特性专性厌氧

，营养要求较高，需羊血和血清培养基才能生长。在厌氧血平板上，菌落直径0.5～1mm、灰白色、凸起、不透明、边缘整齐，一般不溶血，偶有甲型或乙型溶血。生化反应不活泼，在硫乙醇酸钠液体培养基中，呈颗粒状沉淀生长。在其平板上生化反应较为明显，吐温-80可促进其生长。

第21页：韦荣球菌属韦荣球菌属细菌形态相似

，为革兰阴性球菌。直径0.3～0.5μm，多排列成对、近似奈瑟球菌。无鞭毛、无芽胞。专性厌氧，血琼脂平板上生长良好，培养48h后，形成直径1～2mm圆形、凸起、灰白色或黄色混浊、不溶血菌落；在硫乙醇酸盐肉汤中混浊生长，产生小气泡。新鲜培养物立即置紫外线下照射，菌落可显红色荧光，接触空气后荧光消失。生化反应不活泼，不分解糖类，还原硝酸盐。

第22页：革兰阴性无芽胞厌氧杆菌这是一群不形成等

第四节革兰阴性无芽胞厌氧杆菌这是一群不形成芽胞的厌氧杆菌，是人体正常菌群的重要组成成员，部分菌株可作为条件致病菌引起感染。常见菌属有：类杆菌属普雷沃菌属紫单胞菌属梭杆菌属

第23页：类杆菌属类杆菌属(Bacteroid等

类杆菌属类杆菌属(Bacteroides)是临床上最重要的革兰阴性无芽胞厌氧杆菌，临床标本中以脆弱类杆菌（B.fragilis）最常见。脆弱类杆菌为革兰阴性，大小为(0.8～1.3μm)×(1.6～8μm)，着色不均，两端钝圆而浓染，中间不着色染色较浅似空泡。在陈旧培养物或含糖的液体培养基中呈明显多形性，无鞭毛、无芽胞，多数有荚膜。

第24页：普雷沃菌属普雷沃菌属

(Prevotella)是从类杆菌属分出的一个新菌属，代表菌种是产黑色素普雷沃菌(P.melaninogenica)。革兰阴性球杆状，大小约0.8～1.5µm×1.0～3.5µm，排列成双或短链，两端钝圆，有浓染和空泡。

第25页：产黑色素普雷沃菌培养特性专性厌氧菌

，在厌氧平板上2～3天培养后，菌落直径为0.5～3mm，圆形、凸起、不透明，许多菌株呈β-溶血。菌落在紫外光（波长366nm）照射下有砖红色荧光，逐渐转为褐黑色和棕色菌落，5～7天转为黑色菌落，色素出现后荧光即消失。

第26页：紫单胞菌属紫单胞菌属

(Porphyromonas)又称卟啉单胞菌属。代表菌种是不解糖紫单胞菌。革兰阴性杆菌或球杆菌，大小约1.5～3.5µm×0.8～1.5µm，两端钝圆，着色不均匀。35～37℃厌氧培养3～5d可形成1～2mm圆形、凸起、表面光滑、边缘整齐、棕色或黑色菌落。维生素K1和氯化血红素可促进本菌生长及黑色素的产生。

第27页：梭杆菌属梭杆菌属

（Fusobacterium）是临床常见的革兰阴性无芽胞厌氧杆菌，形态细长，两端尖细如梭。坏死梭杆菌形态

第28页：致病性坏死梭杆菌是毒力很强的梭杆菌

，常引起急性扁桃体炎，有时并发单核细胞增多症，是儿童和青年人扁桃体周围脓肿中最常分离到的厌氧菌。局部症状还包括颈间隙感染和颈静脉脓毒性血栓静脉炎，尚可引起胸膜渗出性脓胸、增生性转移脓肿和菌血症。

第29页：革兰阳性无芽胞厌氧杆菌革兰阳性无芽胞等

第五节革兰阳性无芽胞厌氧杆菌革兰阳性无芽胞厌氧杆菌(anaerobic nonsporeformingGram-positive bacilli)有6个属，几十个菌种，临床常见的有丙酸杆菌、优杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、蛛网菌和放线菌。它们多是人和动物皮肤、口腔、肠道等部位的重要生理菌群，在体内起到调节和维持人体微生态平衡的重要作用。

它们的菌落、生化反应、菌体形态等都很相似，鉴定较难。应用气液相色谱法（GLC），根据其代谢产物不同，可对菌属做出初步判定。

第30页：梭状芽胞杆菌梭状芽胞杆菌属

第六节梭状芽胞杆菌梭状芽胞杆菌属（Clostridium）简称梭菌属，是厌氧芽胞杆菌（anaerobic sporeforming bacilli）的唯一菌属，有130个种。革兰染色阳性，芽胞呈圆形或卵圆形，直径大于菌体，位于菌体中央，极端或次极端，使菌体膨大呈梭状。

本菌属细菌在自然界分布广泛，临床有致病性的主要有破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌与艰难梭菌等。

第31页：破伤风梭菌（C.tetani）破伤风等

破伤风梭菌（C. tetani）破伤风梭菌是梭菌属中常见的一种芽胞杆菌，能引起破伤风得名。菌体细长，约为2.0～5.0×0.5～1.5μm。有周鞭毛，能运动，无荚膜。芽胞正圆形大于菌体，位于菌体顶端呈鼓槌状。鞭毛破伤风杆菌镜下形态（18～24h）革兰染色破伤风杆菌镜下形态（48h）革兰染色

第32页：培养特性专性厌氧

，在梭菌培养基（cd基）上37℃培养48h，菌落直径2～4mm，扁平、灰白色、边缘疏松呈羽毛状，伴β溶血。在庖肉培养基中，肉渣部分消化，微变黑，有少量气体。生成甲基硫醇及H2S，导致培养物有腐败性恶臭破伤风杆菌在厌氧平板上羽毛状菌落左侧：在疱肉培养基上生长右侧：阴性对照

第33页：致病条件与毒素伤口需形成厌氧微环境

致病条件与毒素伤口需形成厌氧微环境

• 伤口窄而深（如刺伤），有泥土或异物污染
• 大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部组织缺血
• 有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的伤口无侵袭力，仅在局部繁殖，外毒素致病对氧敏感的破伤风溶血毒素(tetanolysin)质粒编码的破伤风痉挛毒素(tetanospasmin)
• 属神经毒(neurotoxin)，毒性极强(对人致死量<1µg)
• 蛋白质，不耐热

第34页：作用机制与免疫性作用机制见图破伤风等

作用机制与免疫性作用机制见图破伤风免疫属外毒素免疫，主要是抗毒素发挥中和作用抗毒素人工免疫

第35页：典型症状

典型症状

• 苦笑面容
• 角弓反张
• 其他

第36页：微生物学检查法一般不进行涂片镜检和分等

微生物学检查法一般不进行涂片镜检和分等

• 微生物学检查法一般不进行涂片镜检和分离培养典型的症状和病史即可作出诊断

第37页：防治原则防止创口厌氧微环境的形成特等

防治原则防止创口厌氧微环境的形成特异性预防：注射破伤风类毒素紧急预防：注射破伤风抗毒素（tetanusantitoxin，TAT）特异性治疗：早期足量抗毒素及抗生素

第38页：产气荚膜梭菌(C．perfringen等

产气荚膜梭菌(C．perfringens)两端平切粗大杆菌芽胞位于次极端，呈椭圆形，不大于菌体无鞭毛体内有明显的荚膜

第39页：培养特性生长迅速

，代谢活跃，45℃生长最好血琼脂平板：双层溶血环内环完全溶血-θ毒素外环不完全溶血-α毒素蛋黄琼脂平板：Nagler反应牛奶培养基：“汹涌发酵”（stormy fermentation）双层溶血环BNafler反应汹涌发酵现象C

第40页：致病物质α毒素

致病物质α毒素

• 以A型产生量最大
• 引起血管通透性增加伴大量溶血、组织坏死、肝脏、心功能受损
• 在气性坏疽的形成中起主要作用β、ε、ι毒素
• 引起坏死损伤和血管通透性增加肠毒素

第41页：所致疾病气性坏疽食物中毒

所致疾病气性坏疽食物中毒

第42页：微生物学检查法

微生物学检查法

• （一）直接涂片镜检
• 深部创口取材涂片革兰阳性大杆菌白细胞少且不典型伴有其他杂菌
• 早期诊断可避免患者最终截肢或死亡

第43页：分离培养及动物实验

分离培养及动物实验

• 接种血平板或庖肉培养基，镜检及生化反应鉴定
• 动物实验如怀疑食物中毒，在发病后一日内，检出大于105病菌/克食品或106病菌/克粪便可确立诊断微生物学检查法
• （二）

第44页：防治原则预防

防治原则预防

• 及时处理伤口，破坏和消除厌氧微环境
• 预防性的使用抗生素治疗
• 局部感染的处理
• 抗生素
• α抗毒素
• 高压氧舱法

第45页：肉毒梭菌（C．botulinum）芽等

肉毒梭菌（C．botulinum）芽胞椭圆形，粗于菌体，位于次极端，呈汤匙状或网球拍状神经毒素分A～G7个型，各型毒素只能被同型抗毒素中和肉毒毒素不耐热，煮沸1分钟即可被破坏

第46页：致病性致病物质

致病性致病物质

• 肉毒毒素剧毒（对人致死量为0.1µg)

第47页：作用机制作用于外周神经肌肉接头处

，抑制外周神经介质乙酰胆碱的释放，导致弛缓性麻痹前体分子存在，可稳定存在于外环境和胃肠道。复合物进入小肠后，在碱性情况下解离，被吸收进入血循环

第48页：所致疾病食物中毒

所致疾病食物中毒

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所致疾病食物中毒进食污染食物（多为罐头、肉制品、豆制品）发生食物中毒---食入毒素临床表现：少见胃肠道症状，主要为神经末梢麻痹（松弛型）婴儿肉毒病以6个月以内的小婴儿居多症状与肉毒食物中毒类似，便闭、吸乳、啼哭无力

第49页：微生物学检查法标本

微生物学检查法标本

• 食物中毒患者：食物
• 婴儿肉毒病患者：粪便
• 粪便、食物等标本可先80℃加热10分钟，再厌氧培养
• 毒素检查

第50页：防治原则加强食品卫生管理和监督

，提高防范意识（低温保存食物，高温破坏毒素）尽早根据症状作出诊断，迅速注射A、B、E三型多价抗毒素，同时加强护理和对症治疗

第51页：艰难梭菌（C．difficile）该等

艰难梭菌（C．difficile）该菌是人和动物肠道寄生菌，在幼儿的粪便中最常见，为肠道正常菌群成员长期或大量使用抗菌药物后，使得艰难梭菌被药物选择出后大量繁殖而导致抗生素相关性腹泻（antibiotic-associateddiarrhea）。

第52页：生物学性状革兰阳性粗长杆菌

，大小约1.3～1.6μm×3.6～6.4μm，有的菌株有周鞭毛，芽胞为卵圆形，位于菌体次极端，无荚膜。严格厌氧，在血琼脂平板上，48h培养后，菌落直径3～5mm，圆形，略凸起，白色或淡黄色、不透明、边缘不整齐、表面粗糙。在CCFA平板上生长的菌落在紫外线照射下可见黄绿色荧光。艰难梭菌在血平板上菌落特征48h艰难梭菌在CCFA平板上菌落特征48h

第53页：致病性产生A

致病性产生A

• A毒素为肠毒素，能使肠壁出血坏死，液体积蓄
• B毒素为细胞毒素，能直接损伤肠壁细胞，造成伪膜性结肠炎(pseudomembranouscolitis)。