07 第7章 球菌.pptx

第1页：球菌

第7章球菌

第2页：球菌（cocci）

球菌（cocci）

• 菌体形态为球形的一类细菌。临床上通常引起化脓性感染，又称化脓性球菌（pyogenic cocci）。
• 与医学有关的革兰阳性兼性厌氧球菌有9属。本章主要介绍临床最常见的兼性厌氧球菌，包括葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属。
• 革兰阴性球菌主要包括奈瑟菌属（Neisseria）和莫拉菌属（Moraxella）。

第3页：葡萄球菌属

葡萄球菌属

• 第一节葡萄球菌属
• 葡萄球菌属（Staphylococcus）在自然界广泛分布。存在于人和动物的皮肤黏膜上的菌株可致多种化脓性感染，如疖、痈、脓肿、菌血症等，还可引起烫伤样皮肤综合征和毒性休克综合征等疾病。

第4页：葡萄球菌属

葡萄球菌属

• 目前有35个种、17个亚种，引起人类疾病的重要菌有金黄色葡萄球菌（S.aureus），表皮葡萄球菌（S.epidermidis），头状葡萄球菌（S.capitis），人葡萄球菌（S.hominis）等。
• 临床常以是否产生凝固酶分为凝固酶阳性和凝固酶阴性葡萄球菌（Coagulase negativestaphylococcus, CNS）。
• 根据噬菌体分型，可分成4～5群26型。
• 利用质粒大小分型、血清学分型、抗生素分型和细菌DNA的RFLP或PFGE分型，用来研究细菌的致病性、耐药性、流行病学特点和细菌鉴别的关系。
• 该属细菌DNA G+C mol%为30%~39%。

第5页：葡萄球菌属临床意义

葡萄球菌属临床意义

• 临床意义
• （一）致病因素
• 酶类
• 凝固酶
• 耐热核酸酶
• 透明质酸酶、磷脂酶
• 毒素
• 葡萄球菌溶素
• 肠毒素
• 毒性休克综合征毒素
• 杀白细胞素
• 表皮剥脱毒素

第6页：凝固酶

凝固酶

• 葡萄球菌属产生2种血浆凝固酶：
• 结合凝固酶或聚集因子，是结合在菌体表面的凝固酶，能与血浆中的纤维蛋白原交联使菌体快速凝集；
• 游离凝固酶，是细菌分泌到菌体外的凝固酶，能被血浆中的协同因子（cofactor）激活形成复合物，再使纤维蛋白原转变成纤维蛋白，而使血浆凝固；保护病原菌不被吞噬或免受抗体等的作用。

第7页：葡萄球菌属所致疾病

葡萄球菌属所致疾病

• （二）所致疾病
• 化脓性疾病
  • 1）皮肤化脓性感染
  • 2）各种器官的化脓性感染
  • 3）全身感染
• 毒素性疾病
  • 1）食物中毒
  • 2）烫伤样皮肤综合征
  • 3）毒素性休克综合征（TSS）
  • 4）假膜性肠炎
• 医院感染

第8页：葡萄球菌属微生物学检验

葡萄球菌属微生物学检验

• 微生物学检验
• （一）葡萄球菌的基本特性
• 形态结构

第9页：抗原成分

抗原成分

• 葡萄球菌A蛋白（Staphylococcal protein A,SPA）
  • 位于菌体表面，存在于菌细胞壁的一种表面蛋白。可与IgG的Fc段结合，应用于协同凝集试验。
  • A蛋白有抗吞噬作用，还有激活补体替代途等活性。是完全抗原，具属特异性。
• 多糖抗原
  • 具有群特异性，细胞壁中的磷壁酸包含的N-乙酰葡胺核糖醇残基为A群多糖抗原；N-乙酰区糖胺甘油残基为B群多糖抗原。
• 荚膜抗原
  • 几乎所有金黄色葡萄球菌菌株的表面有荚膜多糖抗原的存在。表皮葡萄球菌仅个别菌株有此抗原。

第10页：葡萄球菌属变异性

葡萄球菌属变异性

• 变异性
• 细菌细胞壁缺陷型
  • 受抑制破坏细胞壁药物或外界因素作用，可以形成细胞壁缺陷型细菌，在高渗环境中生存。
• 耐药性变异
  • 部分菌株通过获得外源性的mecA而产生青霉素结合蛋白2a（PBP2a），导致对所有β内酰胺类抗生素耐药。

第11页：葡萄球菌属培养特性

葡萄球菌属培养特性

• 培养特性
• 兼性厌氧菌，有氧条件下生长较厌氧条件迅速和旺盛
• 对营养要求不高，最适生长温度35~37℃，最适pH7.4~7.6。
• 普通培养基上形成直径2~3mm不透明的圆形凸起菌落。产生金黄色、白色、柠檬色等非水溶性色素附着在菌落上。
• 金黄色葡萄球菌
  • 血琼脂平板上菌落周围有透明溶血环
  • 能在含10%~15% NaCl琼脂中生长
  • 甘露醇高盐平板上为黄色菌落。

第12页：葡萄球菌属抵抗力

葡萄球菌属抵抗力

• 抵抗力
• 该菌的抵抗力比其他无芽胞细菌强，耐干燥；近年来耐药性增强，对多种抗菌药物不敏感。葡萄球菌内携带诱导性的青霉素酶和乙酰基转移酶质粒，通过转导进行质粒的转移。

第13页：葡萄球菌的临床检验程序

葡萄球菌的临床检验程序

• （二）葡萄球菌的临床检验程序
• 标本采集：根据感染的部位，采集不同的标本。该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采取时避免病灶周围正常菌群污染。

第14页：葡萄球菌属标本直接检查

葡萄球菌属标本直接检查

• 标本直接检查
• 显微镜检查无菌体液如脑脊液和关节穿刺液等可直接涂片、革兰染色后，显微镜检查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌，则具有重要临床价值；其他体液标本查见细菌的同时伴有炎性细胞则也具有参考价值。可初步报告“查见类似葡萄球菌属革兰阳性球菌”，并进一步进行分离和鉴定。
• 抗原检测乳胶凝集试验测定SPA及荚膜抗原。
• 核酸检测针对耐热核酸酶nuc、16S rRNA可鉴定葡萄球菌，测定macA可以快速检出MRSA。

第15页：葡萄球菌属分离培养与鉴定

葡萄球菌属分离培养与鉴定

• 分离培养与鉴定
• 分离培养
• 脓液、分泌物等临床标本可接种血琼脂平板；
• 有污染的标本如粪便等应接种在选择平板上，如甘露醇高盐平板、哥伦比亚多粘菌素奈啶酸平板；
• 血液标本则用肉汤增菌培养基增菌后。

第16页：初步鉴定

初步鉴定

• 1）菌落性状平板培养基上孵育24h后，菌落外观疑为葡萄球菌者应进行革兰染色证实。
• 2）鉴别试验
• 触酶试验阳性、溶葡萄球菌素（200μg/ml）和呋喃唑酮100μg敏感，氧化酶试验阴性可以与其他革兰阳性球菌区别。
• 红霉素（0.4μg/ml）耐药和甘油需氧产酸可以与微球菌区别。

第17页：种的鉴定

种的鉴定

• 1）凝固酶试验玻片法测定结合型凝固酶；试管法测定分泌型凝固酶。金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌呈现阳性反应。路邓葡萄球菌产生结合型凝固酶而不分泌游离型凝固酶,因而玻片凝固酶试验阳性、试管凝固酶试验阴性。
• 2）耐热核酸酶试验大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄球菌能产生耐热核酸酶。此外表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐热核酸酶。

第18页：3）其他鉴定试验

3）其他鉴定试验

• 磷酸酶试验、吡咯烷酮芳基酰胺酶试验、鸟氨酸脱羧酶试验、脲酶试验、β-半乳糖苷酶、3-羟基丁酮酸试验、新生霉素敏感试验、多粘菌素B耐药试验、糖产酸试验是常用的葡萄球菌属种间细菌的鉴定生化试验。

第19页：肠毒素检测

肠毒素检测

• 1）生物学试验采用幼猫腹腔注射(肉汤培养物或呕吐物)，4h内发生呕吐腹泻和体温升高或死亡等现象者，提示金黄色葡萄球菌肠毒素存在。
• 2）琼脂扩散试验或ELISA法测定用琼脂扩散试验、ELISA法或放射免疫分析法检测样本中的肠毒素。
• 3）肠毒素基因测定针对肠毒素基因设计毒素的通用引物及特异性引物，应用PCR技术可直接进行分型测定。

第20页：链球菌属

链球菌属

• 第二节链球菌属
• 链球菌属（Streptococcus）细菌种类多，分布广，是人和某些动物的寄生菌。其中某些菌种为毒力强的致病菌，另一些则是作为正常菌群栖居于宿主的呼吸道、消化道、泌尿生殖道，还有一些是皮肤上的过路菌和黏膜上的定居菌

第21页：链球菌属分类

链球菌属分类

• 分类
• （一）A、C、G群β溶血性链球菌
  • 菌落直径大于0.5mm
• A群的化脓性链球菌（S.pyogenes）、C群、G群的马链球菌（S.equi）和似马链球菌（S.equismilis）；
  • 菌落直径小于0.5mm
• 具A、C、G群抗原，统称米勒链球菌（S.milleri），主要分为3种：咽喉炎链球菌、中间型链球菌和星座链球菌。除此之外，米勒链球菌还有α溶血和不溶血的细菌。

第22页：B群β溶血性链球菌又称无乳链球菌

B群β溶血性链球菌又称无乳链球菌

• （二）B群β溶血性链球菌又称无乳链球菌（S.agalactiae）。
• （三）α溶血性链球菌
  • 包括肺炎链球菌（S.pneumoniae）和草绿色链球菌群（Viridansstreptococci）。
• （四）不溶血D群链球菌
  • 牛链球菌（S.bovis）

第23页：链球菌属临床意义

链球菌属临床意义

• 临床意义
• （一）致病因素
• 菌体细胞壁成分
• 脂磷壁酸位于细胞壁中并伸展至菌体表面，与黏附宿主细胞有关。
• M蛋白是链球菌细胞壁中的表面蛋白质，具有抗吞噬和抵抗细胞内杀菌作用。M蛋白有抗原性，能刺激机体产生型特异性抗体；与心肌、肾小球基底膜有共同抗原成分。

第24页：侵袭性酶

侵袭性酶

• 链道酶（SD）也称链球菌DNA酶，能分解黏稠脓液中具有高度黏性的DNA，使脓汁稀薄易于扩散。主要由A、C、G群链球菌产生。
• 透明质酸酶能分解细胞间质的透明质酸，使病菌易于在组织中扩散，又称扩散因子。
• 链激酶（SK）又称链球菌溶纤维蛋白酶，能激活血液中溶纤维蛋白酶原转化为溶纤维蛋白酶，使之溶解血块或阻止血浆凝固，有利于细菌在组织中扩散。重组链激酶目前用于治疗血栓性疾病。
• 胶原酶能水解肌肉和皮下组织中的胶原蛋白纤维，便于细菌在组织中扩散。

第25页：外毒素

外毒素

• 链球菌溶素
• 致热外毒素

第26页：链球菌溶素

链球菌溶素

• 有溶解红细胞，破坏白细胞、血小板及毒害心脏作用
• 根据对O2稳定性：链球菌溶素O和链球菌溶素S①1.SLO绝大多数A群链球菌株和许多C、G群菌株能产生SLO，SLO为含-SH基的蛋白质，遇氧时-SH基被氧化为-S-S-基，失去溶血能力。若加入亚硫酸钠和半胱氨酸等还原剂，溶血作用可以逆转。SLO对中性粒细胞有破坏作用；对哺乳动物的血小板、心肌细胞、巨噬细胞、神经细胞等也有毒性作用。抗原性强，感染后患者机体产生抗SLO抗体，病愈后可持续数月甚至数年。风湿热患者血清SLO抗体显著增高，活动性病例升高更显著，可作为新近链球菌感染或风湿活动的辅助诊断。

第27页：SLS是一种小分子的糖肽

•2.SLS是一种小分子的糖肽，无抗原性。对氧稳定，对热和酸敏感。多数A、C、G群及某些其他群链球菌产生。能破坏白细胞和血小板。血琼脂平板上菌落周围的β溶血环是由SLS所致。

第28页：致热外毒素

致热外毒素

• 由A群链球菌溶原菌株产生的致热外毒素（SPE），曾称红疹毒素或猩红热毒素。
• 为蛋白质，对热稳定，具有抗原性，是人类猩红热的主要致病物质，具有损害细胞或组织，使患者产生红疹并具内毒素样致热作用。
• 分为A、B、C三型，A型和C型分别由噬菌体携带的speA和speC编码，B型由染色体基因speB编码。均为超抗原，刺激T细胞诱发淋巴细胞合成和释放TNF、IL-1β和IL-6，进一步导致发热、休克及组织损伤。

第29页：链球菌属所致疾病

链球菌属所致疾病

• （二）所致疾病
• 侵袭性疾病
• 皮肤和皮下组织急性化脓性炎症感染部位界限不明显，脓性分泌物稀薄，常引起蜂窝组织炎；沿淋巴管和血流扩散引起急性淋巴管炎、淋巴结炎及败血症。
• 其他感染如扁桃体炎、咽炎、中耳炎、乳突炎、肾盂肾炎、产褥热等。无乳链球菌引起新生儿菌血症和脑膜炎。肺炎链球菌是大叶性肺炎、支气管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎和菌血症。
• 草绿色链球菌是人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群；可引起心脏瓣膜异常患者的亚急性细菌性心内膜炎。

第30页：毒素性疾病

毒素性疾病

• 猩红热是由产生SPE的A群链球菌引起的全身中毒症状。常继发于严重的咽炎或皮肤软组织感染。少数还可见心肌炎、肾小球肾炎等病变。

第31页：变态反应性疾病

变态反应性疾病

• 风湿热由A群链球菌的多种型别引起，常继发于A群链球菌感染的咽炎，潜伏期为1~5周，易感人群为10岁以下儿童。临床表现以风湿性关节炎、风湿性心脏病为主。致病机制①链球菌细胞壁多糖抗原与心肌瓣膜、关节组织糖蛋白有共同抗原性；胞壁蛋白抗原与心肌有共同抗原性；属第Ⅱ型变态反应。②可能是M蛋白的免疫复合物沉积于心瓣膜和关节滑液膜上造成。属第III型变态反应。

第32页：变态反应性疾病

变态反应性疾病

• 急性肾小球肾炎大多数由A群12型链球菌引起，多见于儿童和少年。临床表现为蛋白尿、浮肿和高血压。其致病机制：①链球菌的某些抗原与肾小球基底膜有共同抗原，机体针对链球菌所产生的抗体与肾小球基底膜发生反应，属第II型变态反应；②由链球菌的M蛋白所产生的相应抗体形成的免疫复合物沉积于肾小球基底膜，造成基底膜损伤，属于第III型变态反应。

第33页：猪链球菌病

猪链球菌病

猪链球菌病•猪链球菌病主要是由几种C、D、E及L群链球菌引起，现已发现其荚膜抗原血清型有35种以上。大多数致病性血清型在1~9血清型。血清型2为最常见和毒力最强的血清型。人主要通过接触病死猪感染。

第34页：链球菌属微生物学检验

链球菌属微生物学检验

• 微生物学检验
• 链球菌的基本特性
• 形态结构
  • 链球菌是直径小于2μm的球形或卵圆形革兰阳性球菌，呈链状排列，链的长短和细菌的种类及生长环境有关。
  • 肺炎链球菌呈矛尖状，宽端相对尖端向外，成双排列，无芽胞、无动力，但能形成荚膜和黏液层。

第35页：链球菌属抗原结构

链球菌属抗原结构

• 抗原结构
• 抗原结构复杂，主要有多糖抗原和蛋白抗原，前者位于细胞壁以此可将链球菌分类为A、B、C、D、F、G等20群，后者主要有M蛋白、F蛋白和G蛋白等。

第36页：链球菌属变异性

链球菌属变异性

• 变异性
• 肺炎淋球菌的pbp1a、pbp2x和pbp2b的单个突变或多个同时突变，导致对青霉素或头孢菌素的耐药。

第37页：链球菌属培养特性

链球菌属培养特性

• 培养特性
• 兼性厌氧菌，肺炎链球菌和草绿色链球菌某些种需要CO2促进其生长
• 营养要求高，须在培养基中加入血液、血清。最适生长温度35~37℃，pH7.4~7.6
• 血平板上形成灰白色，透明或半透明，表面光滑的小菌落；不同菌种的菌落可分别形成α、β、γ三种溶血现象；

第38页：链球菌属培养特性

链球菌属培养特性

• 培养特性
• B群链球菌菌落较大，溶血环较A、C、G群模糊，某些B群链球菌无溶血环。
• 牛型链球菌则为无溶血环呈灰色菌落
• 液体培养基中表现为絮状和颗粒沉淀
• 肺炎链球菌因荚膜多糖使菌落呈黏液状，因产生自溶酶，在平板上培养48小时后出现中心凹陷的“脐窝状”菌落。

第39页：链球菌属抵抗力

链球菌属抵抗力

• 抵抗力
• 本菌属大多数细菌对干燥和消毒剂敏感，除肺炎链球菌外，本菌属细菌较少引起细菌耐药性，但近年对青霉素耐药甚至多重耐药的肺炎链球菌的出现并在全球播散，引起高度关注。

第40页：链球菌的临床检验程序

链球菌的临床检验程序

• （二）链球菌的临床检验程序
• 标本采集
• 咽拭子、痰液、脓汁和血液等标本采集后在2h内运送到实验室，立即进行检查和接种。对B群溶血链球菌的检查，用无菌棉签采集第35周~37周妊娠妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌素（10μg/ml）和萘啶酸（15μg/ml）选择性培养肉汤中孵育18~24h，再作分离培养。

第41页：链球菌属标本直接检查

链球菌属标本直接检查

• 标本直接检查
• 显微镜检查
  • 标本涂片、革兰染色、显微镜检查见链状排列革兰阳性球菌有助于无正常菌群污染标本的诊断。
• 抗原检测
  • 咽拭标本的A群链球菌和女性生殖道标本的B群链球菌可用抗原检测
  • 荚膜肿胀试验用于检查肺炎链球菌。

第42页：链球菌属分离培养与鉴定

链球菌属分离培养与鉴定

• 分离培养与鉴定
• 分离培养采用羊血琼脂平板培养有助于识别溶血特性和进一步鉴定。
• 初代分离需用5%CO2环境，35~37℃孵育24h，观察菌落性状
  • 菌落周围呈现透明溶血环的为β溶血性链球菌，菌落直径大于0.5mm或小于0.5mm。
  • 草绿色溶血环的为α溶血性链球菌
  • 有些菌落灰白色不出现溶血环。

第43页：初步鉴定

初步鉴定

• 取分离平板上生长的菌落周围呈现溶血或不溶血的单个菌落作涂片，革兰染色镜检
  • 革兰阳性球菌，链状或短链状排列
  • 触酶试验阴性，6.5%NaCl不生长者
• 可确定为链球菌属细菌

第44页：β溶血性链球菌鉴定

β溶血性链球菌鉴定

• Lancefield群特异性抗原鉴定
• 根据Lancefield分群的要求提取各菌落的抗原，与相应的分群血清进行凝集试验。
• 与B群抗血清凝集的菌株可直接确认为无乳链菌
• 与F群抗血清凝集并且菌落直径＜0.5mm可确定为米勒链球菌
• 与A、C、G群抗血清凝集的菌株不能确定种类，还需根据菌落大小和生化反应进一步鉴定。

第45页：Lancefield抗原群菌落大小（m等

Lancefield抗原群菌落大小（mm）菌种名PYRVPCAMPBGURA＞0.5化脓性链球菌＋――A＜0.5米勒链球菌＋－B无乳链球菌－＋C＞0.5马链球菌―――＋C＜0.5米勒链球菌－＋――F＜0.5米勒链球菌－＋－G＞0.5似马链球菌―――＋G＜0.5米勒链球菌－＋――未分群＜0.5米勒链球菌－＋－

第46页：杆菌肽敏感试验

杆菌肽敏感试验

• A群链球菌对0.04U杆菌肽几乎全部敏感。
• 从临床分离的菌株中有5%~15%非A群链球菌如B、C和G群链球菌等也敏感。
• 而其他群链球菌绝大多数对其耐药。
• 可作为A群链球菌的筛选试验。有别于其他PYR阳性的β溶血性细菌（猪链球菌、海豚链球菌）和A群小菌落β溶血性链球菌（米勒链球菌）。

第47页：CAMP试验

CAMP试验

• 无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验

第48页：非β溶血链球菌鉴定菌种optochin等

非β溶血链球菌鉴定菌种optochin敏感试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验肺炎链球菌S+—草绿色链球菌R——牛链球菌R—+

第49页：草绿色链球菌鉴定菌群

VP脲酶精氨酸七叶苷甘露醇山梨醇温和链球菌群－－－－－－变异链球菌群＋－－＋＋＋唾液链球菌群＋/－＋/－－＋－－米勒链球菌群＋－＋＋/－＋/――

第50页：肠球菌属

肠球菌属

• 第三节肠球菌属一、概述
• 肠球菌属（Enterococus）
• 广泛分布在自然界，常栖居在人、动物的肠道和女性生殖道
• 为医院感染的重要病原菌

第51页：肠球菌属临床意义

肠球菌属临床意义

• 临床意义
• 肠球菌广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。近年来，研究者在肠球菌内发现了一个约包含150个基因的致病DNA片段，称为“致病岛”。包括多种致病因子，可增强肠球菌离开人类肠道后的侵袭力，引起肠道外感染。

第52页：肠球菌属临床意义

肠球菌属临床意义

• 临床意义
• 致病因素
  • 表面黏附素、炎症调节因子、毒性分泌物。
• 所致疾病
  • 泌尿系感染。
  • 心内膜炎
  • 腹膜炎
  • 牙髓疾病
  • 腹腔和盆腔创伤时肠球菌感染较常见。
  • 肠球菌引起的菌血症常发生于有严重基础疾患的老年人、长期住院接受抗菌药物治疗的免疫功能低下患者。
• 临床标本中分离最常见的是粪肠球菌，约占80%~90%，屎肠球菌约占5%~10%，很少分离到肠球菌属的其他种。

第53页：肠球菌属微生物学检验

肠球菌属微生物学检验

• 微生物学检验
• 肠球菌的基本特性
• 形态结构
  • 为革兰阳性球菌、呈单个，成对或短链状排列，呈球杆状；液体培养基中呈卵圆形、链状排列。无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。
• 抗原成分
  • 含链球菌D群抗原。

第54页：肠球菌属培养特性

肠球菌属培养特性

• 培养特性
• 兼性厌氧，最适生长温度35℃，多数菌株在10℃和45℃均能生长。
• 营养要求不高。
• 部分粪肠球菌菌株在含有兔血、马血或人血的平板上出现β溶血，而在羊血平板上不出现。其他菌种出现α溶血或不溶血。
• 所有菌株在含6.5%NaCl肉汤中能生长，在40%胆汁培养基中能分解七叶苷。

第55页：肠球菌属抵抗力

肠球菌属抵抗力

• 抵抗力
• 肠球菌属细菌
• 对头孢菌素类、林可霉素类和磺胺类抗菌药物耐药。
• 近年来主要表现为对氨基糖苷类耐药和对万古霉素耐药。
• 对万古霉素的耐药是由vanA、vanB和vanC等基因介导。

第56页：肠球菌的临床检验程序

肠球菌的临床检验程序

• （二）肠球菌的临床检验程序
• 标本采集
  • 常规方法采集血、尿、创伤标本和其他拭子。
• 标本直接检查
  • 显微镜检查
• 涂片染色显微镜检查可见单个、成双或短链排列卵圆形革兰阳性球菌。
  • 核酸检测
• 16s rRNA基因、efaA、ace是常用的检测肠球菌的靶基因。
• 万古霉素耐药基因van的检测可直接指示对万古霉素的耐药性。

第57页：肠球菌属分离培养与鉴定

肠球菌属分离培养与鉴定

• 分离培养与鉴定
• 标本接种于含血琼脂平板，若送检标本中含革兰阴性杆菌，可选用选择鉴别培养基，常用的有：
  • 叠氮胆汁七叶苷琼脂，可抑制革兰阴性菌生长，而肠球菌分解七叶苷产生黑色菌落；
  • 哥伦比亚多粘菌素-萘啶酸琼脂（CAN）
  • 苯乙基乙醇琼脂（PEA）
• 接种标本平板置于35~37℃，孵育24h后形成灰白、不透明、表面光滑、直径0.5~1mm大小的圆形菌落，血平板上为α溶血或不溶血，粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血平板上出现β溶血。

第58页：初步鉴定

初步鉴定

• 肠球菌属细菌革兰染色阳性，卵圆形，单个、成双或短链排列。
• 触酶阴性、胆汁七叶苷和PYR阳性、6.5%NaCl肉汤中能生长。
• 但粪肠球菌培养于含血的培养基中，可合成细胞色素或触酶或两者皆有，因而某些菌株可表现为触酶弱阳性。

第59页：与其他触酶阴性

、兼性厌氧革兰阳性球菌鉴别菌属万古霉素分解葡萄糖产气PYR胆汁七叶苷6.5%NaCl生长温度10℃45℃肠球菌属敏感－＋＋＋＋＋乳球菌属敏感－＋＋V＋V链球菌属敏感――a―――V明串珠菌属耐药＋－VbV＋V

第60页：肠球菌属间的菌种鉴定

肠球菌属间的菌种鉴定

• 有赖于糖代谢试验。根据对甘露醇，山梨醇和精氨酸的代谢分成五群。
• 第一群
  • 分解甘露醇、山梨糖产酸，不水解精氨酸；
• 第二群
  • 分解甘露醇和水解精氨酸；
• 第三群
  • 水解精氨酸，不分解甘露醇、山梨醇和山梨糖，
• 第四群为
  • 不分解甘露醇，山梨糖，不水解精氨酸，
• 第五群为
  • 分解甘露醇，不分解山梨糖，不水解精氨酸，

第61页：其他需氧革兰阳性球菌

其他需氧革兰阳性球菌

• 第四节其他需氧革兰阳性球菌
• 触酶阳性的革兰阳性球菌
  • 微球菌属（Micrococcus）、巨球菌属(Macrococcus)、动球菌属(Planococcus)、考氏考克氏菌(Kocuria kristinae)以及触酶微弱阳性的差异球菌属(Alloiococcus)和粘性罗氏菌(Rothia mucilaginosa)
• 触酶阴性的革兰阳性球菌
  • 乳球菌属（Lactococcus）、气球菌属（Aerococcus）、片球菌属（Pediococcus）、孪生球菌属（Gemella）、白联球菌属（Leuconostoc）和生活力缺损菌属（Abiotrophia）

第62页：奈瑟菌属

奈瑟菌属

• 第五节奈瑟菌属
• 奈瑟菌属包括
  • 淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）
  • 脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）
  • 解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黄奈瑟菌、粘液奈瑟菌、浅黄奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延长奈瑟菌、去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌等
• 仅淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌对人致病

第63页：奈瑟菌属临床意义

奈瑟菌属临床意义

• 临床意义
• 脑膜炎奈瑟菌
  • 致病因素
• 荚膜
• 菌毛
• 内毒素
  • 所致疾病
• 流行性脑脊髓膜炎
• 可导致机体免疫缺陷患者的非脑脊髓膜炎、急性或慢性菌血症
• 引起老年人肺炎、结膜炎等
  • 可以在鼻咽部形成带菌状态

第64页：奈瑟菌属临床意义

奈瑟菌属临床意义

• 临床意义
• 淋病奈瑟菌
  • 致病因素
• 菌毛
• 脂多糖
• IgA1蛋白酶
• 外膜蛋白PⅡ
  • 所致疾病
• 单纯性淋病
• 盆腔炎
• 口咽部和肛门直肠淋病；
• 淋菌性结膜炎
• 播散性淋病

第65页：奈瑟菌属微生物学检验

奈瑟菌属微生物学检验

• 微生物学检验
• 奈瑟菌属的基本特性
• 形态结构
  • 革兰阴性双球菌，菌体直径0.6~1.5μm，形似双肾或咖啡豆样，凹面相对
• 抗原成分
  • 脑膜炎奈瑟菌
• 荚膜多糖抗原具有群特异性。分为至少13个血清群,与人类疾病关系密切的主要是A、B、C、Y及W-135群。A群及C群是引起流行性脑脊髓膜炎的主要血清群。
• 外膜蛋白
  • 淋病奈瑟菌
• 菌毛蛋白抗原、外膜蛋白抗原、脂寡糖抗原

第66页：奈瑟菌属培养特性

奈瑟菌属培养特性

• 培养特性
• 大多数奈瑟菌属细菌需要在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏感，在培养基中需加入可溶性淀粉。需氧生长，初次分离需要5%~7%CO2和高湿度刺激生长。最适生长温度35~37℃，低于30℃不生长。
• 血琼脂平板或巧克力（色）琼脂平板上呈光滑、湿润、透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰蓝色菌落；
• 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状的菌落。在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜。
• 脑膜炎奈瑟菌于孵育24小时后在培养基上发生自溶。

第67页：奈瑟菌属抵抗力

奈瑟菌属抵抗力

• 抵抗力
• 奈瑟菌属细菌对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感。对青霉素敏感，但近年来由质粒介导的β内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多。

第68页：生化特性菌种在巧克力平板上的菌落形态

生化特性菌种在巧克力平板上的菌落形态

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生化特性菌种在巧克力平板上的菌落形态MTMMLNYC生长试验氧化分解产酸硝酸盐还原多糖合成DNA酶巧克力平板或血平板（22℃）营养琼脂（35℃）葡萄糖麦芽糖乳糖蔗糖果糖脑膜炎奈瑟菌灰褐色、半透明、光滑1～2mm+-V++------淋病奈瑟菌灰褐色，半透明，光滑0.5～1mm+--+-------卡他莫拉菌浅红棕色，不透明，干燥1～3mmV++-----+-+

第69页：奈瑟菌属的临床检验程序

奈瑟菌属的临床检验程序

• 标本采集
  • 脑膜炎奈瑟菌
• 无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本，采集后立即送往实验室，或用血平板进行床边接种后置35℃孵育。血液标本接种在血液培养瓶中置35℃孵育。标本运送时需要35℃保温。
  • 淋病奈瑟菌
• 用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处停留10~15秒时间，蘸取阴道和宫颈分泌物；
• 采集尿道分泌物时应弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本；
• 尿液可作为检查标本；
• 直肠肛拭标本应废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物；
• 新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物。

第70页：奈瑟菌属标本直接检查

奈瑟菌属标本直接检查

• 标本直接检查
• 显微镜检查
  • 脑脊液
• 直接或经离心后取沉淀涂片
  • 皮肤瘀点渗出液涂片
  • 革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断。

第71页：奈瑟菌属标本直接检查

奈瑟菌属标本直接检查

• 标本直接检查
• 显微镜检查
  • 疑为淋病的标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查。
  • 男性尿道分泌物和新生儿眼结膜分泌物标本中见到中性多形核细胞内、外较多的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似淋病奈瑟菌”。
  • 由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄居，当女性宫颈或直肠拭子标本涂片中见到胞内、胞外大量革兰阴性双球菌时，必须由培养结果加以证实。

第72页：抗原检测

抗原检测

• 胶乳凝集试验
  • 包括脑膜炎奈瑟菌A、C、Y、W125血清型的多价抗体和血清型B抗体

第73页：奈瑟菌属核酸检测

奈瑟菌属核酸检测

• 核酸检测
• 脑膜炎奈瑟菌
  • 检测靶片段的基因有16S rRNA基因、转录调控基因crgA、荚膜转移基因ctrA和插入序列IS1106等
• 淋病奈瑟菌
  • 隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶DNA甲基转移酶基因、透明蛋白(opa)基因、菌毛DNA探针、rRNA基因探针和porA基因。

第74页：奈瑟菌属分离培养与鉴定

奈瑟菌属分离培养与鉴定

• 分离培养与鉴定
• 分离培养
• 脑脊液
  • 接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板
• 咽拭子或鼻咽拭子
  • 接种在选择性培养基上如改良的Thayer-Martin（MTM）、GC-Lect、NewYorkCity（NCY）等培养基。
• 血液标本
  • 经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力（色）琼脂或羊血琼脂平板上。置5%~7%CO235℃孵育培养，每隔24小时观察平板。
• 疑为淋病奈瑟菌感染的标本接种于
  • 选择培养基如MTM、Martin-Lewis（ML）或NYC。立即置于5%CO2气体条件下35~37℃孵育。每隔24小时观察平板。

第75页：奈瑟菌属鉴定

奈瑟菌属鉴定

• 鉴定
• 初步鉴定
  • 直径1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落，涂片革兰染色见阴性双球菌，氧化酶和触酶试验阳性可初步确定为奈瑟菌属。
• 最终鉴定
  • 葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌；用分型血清确定血清型别。
  • 葡萄糖发酵试验阳性，其他糖类阴性。可以确认为淋病奈瑟菌。

第76页：卡他莫拉菌

卡他莫拉菌

• 可存在于健康人群的上呼吸道。近十年来报道是导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎的病原体；在免疫抑制和ICU的患者可导致菌血症；是社区呼吸道感染的主要病原体之一。
• 卡他莫拉菌在血液琼脂或巧克力（色）琼脂平板上生长良好，35℃24小时孵育后菌落直径1~3mm，灰白色、光滑，用接种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动。氧化酶和触酶阳性。不发酵葡萄糖和其他糖类产酸。大多数菌株还原硝酸盐和产生DNase。三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈瑟菌属鉴别。可产生诱导型β内酰胺酶。