29 第29章 反转录病毒.pptx

第1页：反转录病毒

第29章反转录病毒

第2页：艾滋病概述

艾滋病概述

• 获得性免疫缺陷综合征，简称艾滋病（Acquired immunodefieiency syndrome，AIDS）
• 由一种名为“人类免疫缺陷病毒”（humanimmunodeficiency virus, HIV）所导致的疾病。
• 主要侵袭辅助Ｔ淋巴细胞，破坏免疫系统，最终使患者免疫功能衰竭而死亡。
• 传染性强，死亡率高，号称“超级癌症”

第3页：HIV的发现Montagnie(LAS)

HIV的发现Montagnie (LAS) 1983.Science220: 868-871Gallo (HTLV) 1983.Science220: 865-86Levy (ARV) 1984.Science225: 840-8421986国际病毒分类委员会：HIVHIV-21986西非

第4页：HIV的分型及其亚型

HIV的分型及其亚型

• 现有两型HIV：HIV-1和HIV-2，
• 种类
  • HIV-1M（Major）组A→D,F→H,J,KO（Outlier）组ON（Non-M non-O）组N
  • HIV-2A →F
• 特点
  • 有相对优势亚型
  • 同一亚型差异很大
  • 亚型内的变异水平估算存在时间
  • 不同亚型传播途径和致病性不一
  • 不同亚型对抗-HIV药物引起耐药不同
  • 亚型重组

第5页：HIV生物学特性

HIV生物学特性

• 反转录病毒科，慢病毒属，人类免疫缺陷病毒组
• 根据病毒的生物学特性对HIV-1进行分群病毒与宿主细胞结合所利用的辅助受体的不同R5毒株(利用CCR5)X4毒株(利用CXCR4)根据宿主范围非合胞体诱导株（NSI）合胞体诱导株（SI）复制特性不同毒力株快/高型无毒力株低/慢型

第6页：HIV生物学特性—结构

HIV生物学特性—结构

• 病毒呈球形，直径100
  • 120nm，电镜下可见一致密的圆锥状核心
• 核心：2个逆转录酶-将RNA转录成DNA蛋白酶(p11)-将大片断蛋白切小整和酶(p32)-将HIV原病毒DNA插入宿主细胞DNA中核心膜蛋白(p24,p17)
• 包膜：脂质膜-“借用”宿主细胞的细胞膜gp120-病毒的膜蛋白，与被感染细胞CD4相结合部分gp41-病毒的膜蛋白，跨脂质膜的部分

第7页：

第8页：HIV生物学特性—基因结构

HIV生物学特性—基因结构

• 由两条单链RNA组成，每个基因组约为9.7k，编码9个基因
• RNA中含有3个结构基因gag、env和pol，6种调控基因tat, vif, vpr, vpx (vpu), nef, rev
• gag基因编码病毒的核心蛋白
• pol基因编码病毒复制所需要的酶类（逆转录酶、整合酶和蛋白酶）
• env基因所编码病毒包膜蛋白，是HIV免疫学诊断的主要检测抗原
• 调控基因编码辅助蛋白，调节病毒蛋白合成和复制

第9页：polgagenvvifLTRrevvp

rtatvpurevtatnefLTRP55gp160P17P24P7P6P10P66/51P15P32gp120gp41

第10页：HIV生物学特性—临床意义

HIV生物学特性—临床意义

• HIV结构成分与病毒感染、临床诊断、药物、试剂和疫苗研究密切相关
• 包膜糖蛋白是病毒进入细胞的门户
• 针对各种病毒抗原（gp120,gp41,gp24等）产生的抗体是临床诊断的重要物质基础

第11页：HIV生物学特性—对病程的影响

HIV生物学特性—对病程的影响

• 病毒与宿主之间的相互作用是决定病程进展的关键因素。NSI型
  • 早期，进展慢，R5受体SI型
  • 晚期，进展快，CXCR4受体

第12页：HIV的感染性

HIV的感染性

• 对外界抵抗力较弱
• 对热、干燥敏感60℃ 60min, 80℃ 30min，121℃ 15min, 134℃ 3min
• 不耐酸（PH6），稍耐碱（PH9）
• 对化学品敏感0.5％次氯酸钠、70%酒精、10%漂白粉、2%戊二醛、4%福尔马林等
• 对紫外线不敏感
• 注射器具、医疗用具通过高温消毒、煮沸或蒸汽消毒完全可以达到消毒目的

第13页：HIV传播途径

HIV传播途径

• 性途径同性恋、异性恋、双性恋、共用性模拟器
• 血液途径输血或血液制品、受精液或卵子、与他人共用针具静(肌)注毒品、意外损伤后接触HIV感染性材料
• 母婴垂直传播妊娠、生产、母乳喂养

第14页：HIV致病机制—高速复制

HIV致病机制—高速复制

• 每天产生10-12亿个新病毒颗粒
• HIV变异
  • 每天突变1万个逆转录酶缺乏3’-5’外切核酸的校读功能，使RNA转录为DNA时经常出现错误。
  • 比真核细胞高100万倍。

第15页：HIV致病机制—进入易感细胞途径HIV等

HIV致病机制—进入易感细胞途径HIV-1通过gp120与靶细胞表面CD4分子和趋化因子受体结合

第16页：HIV致病机制—关于第二受体

HIV致病机制—关于第二受体

• 与HIV有关的辅助受体有2类：CC型辅助受体：CCR1,CCR2b,CCR3.CCR5CXC型辅助受体：CXCR4
• CCR5是最主要的第二受体，第二受体基因在不同人种中遗传的突变率有明显差异。缺乏第二受体表达的个体似乎对HIV-1有一定的抗性。

第17页：HIV致病机制—进入的其他方式

HIV致病机制—进入的其他方式

• 病毒－细胞融合NSI型与SI型
• 半乳糖苷神经酰胺（GalC)受体途径
• MHC相关分子，淋巴细胞功能相关抗原1，Fc和补体受体介导途径。

第18页：HIV致病机制—复制周期吸附和穿入脱衣等

HIV致病机制—复制周期吸附和穿入脱衣壳和逆转录环化整合转录翻译与装配病毒体成熟出芽

第19页：HIV致病机制—人体变化

HIV致病机制—人体变化

• 体内播散期：2天达淋巴结，5天入血循环全身播散。
• 原发HIV感染期：一般2－4周
• 血清转换期
• 无症状感染期
• 艾滋病前期
• 艾滋病期
• 艾滋病晚期

第20页：HIV致病机制—临床结局

HIV致病机制—临床结局

• 典型进展者：8-10年内，免疫功能逐渐下降。
• 快速进展者：CD4+细胞计数在2-5年内迅速下降
• 长期存活者：（长期不进展者）维持健康状态12年以上，并且CD4+细胞计数维持正常。病毒载量低，NSI株，抗体不加重感染，I型细胞因子，CD8+细胞抗病毒反应很强。

第21页：临床阶段

CD4+T细胞C艾滋病指针性症状B出现症状，不是A或CA无症状或急性HIV感染或持续性全身淋巴结肿大C1B1A1>500/ul（≥29%）C2B2A2200-499/ul（14-28%）C3B3A3<200/ul（<14%）成人及青少年艾滋病分期标准（CDC，美国，1993年）CD4<200/ul和/或出现艾滋病指针性症状（如卡氏肺囊虫肺炎等）时，就可定义为进入艾滋病期。

如表中A3，B3，C1-3期。

第22页：HIV检测

HIV检测

• 直接检测病毒或其组成部分
• 检测人体HIV免疫反应
  • HIV特异性抗体从感染到血清抗体阳转有一段窗口期，平均为1-3个月，有一小部分HIV感染者出现延迟反应

第23页：P24抗原测定适用范围

P24抗原测定适用范围

• HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断
• HIV-1阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断
• 第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应，但HIV-1抗体确认阴性者的诊断
• 监测病程进展和抗病毒治疗效果

第24页：P24抗原测定结果报告和解释

P24抗原测定结果报告和解释

• HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认
• HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能依此确诊
• HIV-1 P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染

第25页：HIV核酸检测

HIV核酸检测

• 窗口期辅助诊断
• 病程监控
• 指导治疗方案及疗效评价
• 预测疾病进程

第26页：HIV核酸检测—定性检测

HIV核酸检测—定性检测

• 用于HIV感染的辅助诊断。通常使用PCR或RT-PCR技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂，引物可来自文献或自行设计，应尽量涵盖所有的或常见的毒株，也可使用复合引物。
• 通常根据扩增产物的电泳图像判定结果，阳性结果还要进行核酸序列测定来确定。
• HIV核酸检测阴性,只可报告本次实验结果阴性，不可排除HIV感染。
• HIV核酸检测阳性,可作为诊断HIV感染的辅助指标，不单独用于HIV感染的诊断。
• 报告核酸定性检测结果时应注明反应条件和所使用的引物序列。

第27页：HIV核酸检测—定量检测

HIV核酸检测—定量检测

• 常用于监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果。目前常用的方法有逆转录PCR实验（RT-PCR）、核酸序列扩增实验（NASBA）、分支DNA杂交实验（bDNA）等，这几种进口试剂盒的最低检测限为20-50拷贝/毫升
• 按照仪器读数报告结果，应注明使用的试验方法、样品种类和样品量
• 测定结果小于最低检测限时，应注明最低检测限水平。注意低于最低检测限的结果不能排除HIV感染。
• 应附上仪器打印的数据

第28页：HIV核酸检测—样品的采集和处理

HIV核酸检测—样品的采集和处理

• 用于HIV核酸检测的样品有全血、血浆、组织和其他分泌物，有时还包括生物制品
• 采集样品应避免微生物和核酸污染。避免RNA酶造成的降解，采样后4-8小时内处理。处理后的样品应分装、标记，冻存于-20℃以下，RNA类样品冻存于-80℃
• 应在2-8℃条件下运送。特殊情况下，可以用特快专递形式投寄，但必须将盛样品的试管包扎好，保证不会破碎和溢漏

第29页：OrganonBayer(前Chiro等

OrganonBayer(前Chiro等

• OrganonBayer (前Chiron)RocheNuclisens HIV-1 QTbDNART-PCR技术与Roche基本相同2.0版结果约为RT-PCR的50%，3.0版结果与Roche基本相同约2xbDNA 2.0结果比较通过了FDA认证可使用多种组织，如生殖道分泌液对A-G亚型有较好的反应性检测范围大操作时间较少对A-G亚型有较好的反应性通过了FDA认证假阳性结果较bDNA少1.5版对A-G亚型有较好的反应性优点早期版本（NASBA）对部分亚型（G亚型）反应性差。操作复杂，样品提取(不使用自动提取仪时)和测定反应时需要进行大量的手工操作。不适合一次大量检测，ECL读数仪每次只能进行12个样品的检测。实验内、外误差相对较大。对低值样品检测的特异性较差。无内部质量控制，尤其在3.0版中为单孔检测时，无法控制由于提取或加样操作的失误。不同版本间差异较大，2.0版约为RT-PCR50%，3.0版结果与Roche基本相同表明两个版本间差异可能达到50%。对除血浆、血清外的大部分体液样品无法进行检测。对抗凝剂敏感，只能使用EDTA。操作容易污染测定范围较小（相对于NASBA）少数生物样品反应受抑制，如精液、乳汁和唾液早期版本对部分亚型反应性较差，1.0版对非B亚型的样品反应性普遍较差，
• 版通过改进对O亚型检测能力较差缺点Nuclisens HIV-1 QT: 40-10,000,000c/mL (取决于样品量)bDNA 3.0版:100-500,000 c/mL标准版(Amplicor 1.0及1.5)400-750,000 c/mL超敏版(Ultra-Direct 1.0 and1.5):50-75,000 c/mL检测范围HIV核酸检测
  • 定量检测方法的比较

第30页：HIV核酸检测—定量检测方法的选择

HIV核酸检测—定量检测方法的选择

• 目前用于统一不同定量方法检测值的标准品尚未问世
• 不同定量方法结果之间还无法直接进行比较
• 建议同一患者治疗前后用同一方法进行HIV定量检测

第31页：病毒分离培养

病毒分离培养

• 可用于HIV-1感染的辅助诊断及HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断
• 培养及分离HIV需要在特定的P3实验室进行，且HIV的分离率在30%-60%，这项试验仅用于HIV株的保存和科学研究

第32页：HIV抗体诊断目前临床上实际应用的是测等

HIV抗体诊断目前临床上实际应用的是测等

• HIV抗体诊断目前临床上实际应用的是测定特异性HIV抗体，包括初筛和确认实验。

第33页：HIV抗体诊断—检测试剂筛查试剂必须是等

HIV抗体诊断—检测试剂筛查试剂必须是HIV-1/2混合型、经国家药品监督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。目前常用的筛查试剂有酶联免疫(ELISA)、颗粒凝集和其他快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛查应采用酶联免疫试剂。

自采自供血的单位必须进行HIV抗体检测，在尚未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经过培训的技术人员在规定的场所用快速试剂进行血液筛查。

第34页：HIV抗体诊断—ELISA方法

HIV抗体诊断—ELISA方法

• 目前最常用的初筛实验
• 1985年第一代检测HIV-1抗体的试剂盒问市（全病毒抗原间接法）
• 目前采用第四代检测HIV-1抗体的试剂盒（以重组的多肽抗原和抗P24抗体包被的双抗原夹心法）
• 窗口期缩短了2-3周

第35页：HIV抗体诊断—四代试剂比较solid等

HIV抗体诊断—四代试剂比较solidphasespecificdetection ofconjugate第一代病毒裂解液HIV-1IgG抗体HIV-1-IgG抗体第二代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1 /-2IgG抗体HIV-1 /-2IgG抗体第三代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1 /-2 /-OIgM / IgG抗体HIV-1 /-2 /-O病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1 /-2 /-O第四代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1 /-2 /-Oanti-p24 AbIgM / IgG抗体HIV-1 /-2 /-Op24抗原病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1 /-2 /-Oanti-p24抗体

第36页：Closing the window<

infectivity=>4thgen3rdgen=>=>1st-2ndgenHIV antigenIgM abIgG abDetection limit<= window第一/二代试剂检测IgG抗体，第三代试剂检测IgG、IgM抗体,第四代试剂同时检测IgG、IgM抗体和P24抗原使窗口期缩短。

第37页：HIV抗体诊断—结果报告和处理

HIV抗体诊断—结果报告和处理

• 阴性反应出具HIV抗体阴性报告
• 如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除“窗口期”的可能，可以进行HIV-1 P24抗原或HIV核酸检测，或2－3个月以后再做抗体检测
• 筛查实验呈阳性发现反应，可出具“HIV抗体待复查”的报告，不能出阳性报告

第38页：样本初筛检测一阴一阳均阳性反应阴性报告等

样本初筛检测一阴一阳均阳性反应阴性报告送确认重复检测阴性报告均阴性反应阳性反应原有试剂＋另一种原理初筛试剂选用初筛试剂阴性反应HIV抗体初筛检测流程图

第39页：HIV抗体诊断—快速诊断试剂

HIV抗体诊断—快速诊断试剂

• 采用乳胶凝集、免疫斑点和免疫层析三种原理
• 快速、不需特殊仪器
• 敏感度、特异度低于ELISA，且价格贵
• 适用于血站覆盖不到的边远地区/城市大医院急诊手术前检查
• 快速诊断阳性结果还需经ELISA方法验证

第40页：阳性结果阴性结果

HIV抗体诊断—快速诊断试剂阳性结果可出现患者带和质控带两条带，阴性结果只出现质控带一条带

第41页：HIV抗体诊断—HIV抗体确认

HIV抗体诊断—HIV抗体确认

• 常用的确认实验方法是免疫印迹法（WB）
• 免疫印迹试剂有HIV-1/2混合型和单一型，一般先用HIV-1/2混合型试剂进行检测

第42页：HIV抗体诊断—蛋白印迹实验（WB）

HIV抗体诊断—蛋白印迹实验（WB）

• 广泛使用的确认实验
• 用聚丙烯酰胺凝胶电泳将纯化的HIV抗原蛋白分开后转移到硝酸纤维膜上
• 标本的HIV抗体与条带上的抗原结合，再加入酶偶联的抗人IgG抗体和底物，在抗原抗体结合的部位会出现有色条带
• 可检测标本中针对HIV不同抗原的抗体，故被用做确认试剂
• 不同的研究机构有不同的判定标准

第43页：HIV抗体诊断—WB结果判定标准阴性阳等

HIV抗体诊断—WB结果判定标准阴性阳等

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HIV抗体诊断—WB结果判定标准阴性阳性组织无条带或只有P172 ENV+GAG+POLWHO无条带1 ENV + p24/p31FDA（USA）无HIV-1特异性条带２ENV或１ENV+p24CHINA“不确定”(±)：出现HIV-1特异性条带，但带型不足以确认阳性，每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性

第44页：HIV抗体确认实验结果a强阳性对照

（HIV-1和HIV-2）b弱阳性对照（HIV-1）c阴性对照d典型的HIV-2血清阳性反应a b c dgp160gp120p66p55p51gp41p39p31P24p17血清对照HIV-2特异带

第45页：初筛检测阳性标本两种初筛试剂阴性报告阴等

初筛检测阳性标本两种初筛试剂阴性报告阴性报告阴性反应一阴一阳阳性反应免疫印迹法WB-1/2混合型复核报告HIV-2血清学阳性反应,必要时测核酸阴性反应可疑反应HIV-2阳性反应免疫印迹法WB-2阴性报告出现gp36阴性反应可疑反应HIV-1阳性报告HIV-1阳性反应每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性HIV抗体确认实验流程图

第46页：CD4+T细胞绝对数量有效治疗8周后C等

CD4+T细胞绝对数量有效治疗8周后CD4+T淋巴细胞数量增加50/ulHAART无效CD4+T细胞数量下降CD4+T淋巴细胞介导的免疫功能逐渐丧失CTL丧失必要的体内环境，功能下降HIV感染CD4+T淋巴细胞小于350/ul（结合病毒载量，确定治疗时机）

第47页：CD4+T细胞绝对数量HIV感染通过等

CD4+T细胞绝对数量HIV感染通过多种直接和间接的病理机制，导致CD4+T数量的缺失。CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞，其数量和功能的下降是HIV感染引起人体免疫功能缺陷的主要体现。外周血中CD4+T淋巴细胞的数量对于确定HIV感染状态、是否进入AIDS期、机会性感染及肿瘤发病的可能性以及评价治疗效果具有极其重要的作用。

第48页：结果回报单

结果回报单

第49页：CD4绝对计数结果

CD4绝对计数结果

第50页：病毒变异和耐药性的测定

病毒变异和耐药性的测定

• 随着HAART治疗的广泛开展，病毒变异和耐药株正在不断出现，甚至对一个药物的耐药可引起多种药物的交叉耐药。
• 因此近年来各国相继建立起病毒变异和耐药的测试方法，包括基因型HIV耐药测试和表型HIV耐药测试。

第51页：基因型HIV耐药性测试方法

基因型HIV耐药性测试方法

• 当病毒对某些药物产生耐药性时，病毒基因会发生一些明确的突变。病毒耐药基因型的检测有助于预测某些药物的治疗效果。
• 检查从病人血液标本中分离到的HIV基因物质，应用核酸酸序列分析或杂交技术以确定病毒变异的位点，并可参考已有数据库按不同亚型进行比较。在确认变异后，与既往耐药或交叉耐药研究比较，间接地估计药物耐药情况，
• 简单快速，费用低。
• 缺点是能确认所分离到的基因变异，但无法指出药物耐药的程度。

第52页：与逆转录酶有关的变异与蛋白酶有关的变异

与逆转录酶有关的变异与蛋白酶有关的变异

第53页：表型HIV耐药性测试方法

表型HIV耐药性测试方法

• 能直接测出HIV-1对药物的敏感度，并能揭示事先存在或交叉的耐药情况，有利于指导HIV-1感染者有效地用药。
• 目前市面上供应试剂盒已有2种，即AV（VicroAntivirogram）和PS（VirologicPhenoSense），两者方法均应用从生长于载体中的HIV-1而获得的重组病毒和病人标本中蛋白酶与逆转录酶序列，分析与野病毒之间IC50值相差倍数，一般达5--10倍以上为阳性。
• 这种方法的最大优点是可以获得各种药物耐药量度数据，但不足的是试验慢又昂贵，技术要求高。

第54页：VirologicPhenoSense等

VirologicPhenoSense等

• Virologic PhenoSense结果

第55页：HIV检测注意事项

1.筛查试剂必须是HIV-1/2混合型、经国家药品监督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。目前常用的筛查试剂有酶联免疫(ELISA)、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛查应采用酶联免疫试剂。

自采自供血的单位必须进行HIV抗体检测，在尚未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经过培训的技术人员在规定的场所用快速试剂进行血液筛查。

第56页：在所有试验检测中

在所有试验检测中

• 内部对照是质量控制的基础，该质控血清为试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清，每次检测都必须用同批号试剂盒作内部对照。
• 外部对照质控血清为实验室设置的弱阳性对照，一般以试剂盒临界值的2-3倍为宜。HIV检测注意事项

第57页：实验室结构和设施

实验室结构和设施

• 包含微生物举例麻疹病毒沙门氏菌乙型肝炎病毒HIV血清学检测衣原体志贺氏菌HIV检测生物安全
  • 二级生物安全

第58页：HIV检测生物安全—二级生物安全

HIV检测生物安全—二级生物安全

• 设计和建造的特殊要求消毒设施（高压灭菌锅、化学消毒装置等）洗眼装置可自动关闭的门锁门口有发光指示装置换气装置（3-4次/小时）

第59页：满足一级实验室(标准微生物操作规程)各等

满足一级实验室(标准微生物操作规程)各等

• 满足一级实验室(标准微生物操作规程)各款要求，在此基础上特别注意
• 制定出入制度
• 实验室人口贴上生物危险标志
• 制定实验室特定的生物安全操作规则
• 每年一次最新培训制度HIV检测生物安全
  • 二级生物安全特殊微生物操作规程生物危险Ⅱ级

第60页：禁止用手处理破碎的玻璃器具

禁止用手处理破碎的玻璃器具

• 使用塑料器材代替玻璃器材。
• 培养基、组织、体液及其它具有潜在危险性的废弃物须放在防漏的容器中储存、运输及消毒、灭菌

第61页：用过的针头禁止折弯

、剪断、折断、重新盖帽，禁止用手直接从注射器取下。用过的针头必须直接放入防穿透的容器中。非一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒

第62页：

第63页：工作人员应接受必要的免疫接种和检测

工作人员应接受必要的免疫接种和检测

• 必要时收集从事危险性工作人员的本底血清
• 严格执行实验室工作人员年度采血检测HIV抗体和备案制度。每半年进行一次HIV抗体检测，并保留样品
• 对从事艾滋病实验室工作的人员，因工作中意外事故造成HIV职业暴露者，所在单位应负责解决抗病毒及其他相应治疗的医疗费用HIV检测生物安全
  • 二级生物安全特殊微生物操作规程

第64页：HIV检测生物安全—二级生物安全

HIV检测生物安全—二级生物安全

• 实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒
• 人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案
• 禁止将无关动物带入实验室

第65页：处理以下致病微生物时应在生物安全柜(Ⅱ等

处理以下致病微生物时应在生物安全柜(Ⅱ等

• 处理以下致病微生物时应在生物安全柜(Ⅱ级)中进行，包括:高浓度大容量有喷溅可能性
• 上述材料的离心操作如使用密封的离心机转子或安全离心杯，且只在生物安全柜中开闭，可在实验室中进行。
• Ⅱ级生物安全柜必须每年进行一次年度现场检测。HIV检测生物安全
  • 二级生物安全安全设施和个体防护

第66页：安全设施和个体防护

安全设施和个体防护

• 当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行时，须使用面部保护装置
• 应有相应的SOPHIV检测生物安全
  • 二级生物安全

第67页：HIV检测生物安全—二级生物安全安全设等

HIV检测生物安全—二级生物安全安全设等

• HIV检测生物安全
  • 二级生物安全安全设施和个体防护
• 在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服，不得穿着外出。用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃。
• 当手可能接触感染材料、污染的设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室，工作完全结束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。

第68页：样品从一个实验室转送到另外一个实验室

，必须是血清或血浆，除特殊需要外，一般不能用全血。且需置于带有盖帽的试管内，防止样品流出，试管上应有明显的标记。清楚地标记为感染性材料（按所在生物安全防护实验室的级别标明相同的级别）。感染性材料必须放在密闭的管子中，再放入含有足够吸水材料的生物危险管中，以防泄漏。

将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理，在所放试剂管周围上下均垫有软性物质，以免破碎，容器外表有HIV检测专用字样。如果路程较远或者气候炎热时，盛有样本的容器应至于4℃以下转运样本的转送和发放生物危险Ⅲ级

第69页：第一道包装第二道包装防渗漏包装加入吸水等

第一道包装第二道包装防渗漏包装加入吸水等

• 第一道包装第二道包装防渗漏包装加入吸水层外包装

第70页：实验室结构和设施

实验室结构和设施

• 包含微生物举例结核分枝杆菌牛分枝杆菌鼠疫杆菌炭疽杆菌Q热病原体HIV (血清学检测除外)澳大利亚立克次氏体加拿大立克次氏体HIV检测生物安全
  • 三级生物安全

第71页：人类嗜T细胞病毒

人类嗜T细胞病毒

• RNA肿瘤病毒
• HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ在电镜下呈球形:核衣壳：核心：RNA与逆转录酶；衣壳：含有P24和P18两种结构蛋白；包膜：刺突：糖蛋白(gp120)，能与细胞表面的CD4分子结合。

第72页：HTLV

HTLV

• gag、pol、env 3个结构基因，功能与HIV基本一致
• tax、rex 2个调节基因，除有增加病毒基因的转录和调节病毒基因产物表达作用外，尚能激活细胞的IL-2基因和IL-2受体基因的作用
• HTLV-Ⅰ型和Ⅱ型的基因组的同源性约50%。

第73页：成人T细胞白血病

(adult T-cell leukemia,ATL)：HTLV-Ⅰ型引起，多为40岁以上的成人发病。T细胞大量增生，转化、癌变，淋巴结及肝、脾肿大，并发高钙血症、皮肤红斑、皮疹、结节等，预后不良。

HTLV-Ⅰ型相关脊髓病(HTLV-Ⅰassociatedmyelopathy,HAM)及热带痉挛性下肢轻瘫(tropicalspastic paraparesis,TSP)：HTLV-Ⅰ型引起，因两者相似，故总称HAM／TSP。HAM以女性居多，主要症状为慢性进行性步行障碍与排尿困难，有时伴有感觉障碍。用激素和IFN治疗可缓解。HTLV—致病性

第74页：传播途径

传播途径

水平传播：可通过输血、注射、性交等方式垂直传播：通过胎盘、产道和哺乳等途径在母婴间。HTLV—致病性

第75页：病毒分离与鉴定采取患者新鲜外周血分离淋等

病毒分离与鉴定采取患者新鲜外周血分离淋巴细胞，经PHA处理后，加入含有IL-2的营养液继续3～6w，然后用电镜观察细胞中的C型病毒颗粒，并检查细胞培养液上清的逆转录酶活性，最后用免疫血清或单克隆抗体进行病毒鉴定。HTLV—微生物学检查法

第76页：抗体检测

抗体检测

• 。2.间接免疫荧光法以HTLV-Ⅰ/Ⅱ感染的T细胞株作靶细胞抗原制成细胞涂片，加患者血清孵育后再加荣光素标记的抗人IgG抗体，在荧光显微镜下检测患者血清中的HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗体。此外，尚可用胶乳凝集法(PA法)及免疫印迹法(WB法)检测。后者可测定患者血清中病毒结构蛋白的抗体，常用于HTLV-Ⅰ/Ⅱ病毒抗体检查的证实试验。HTLV
  • 微生物学检查法