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14 根系活力的测定[TTC法].ppt

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本实验课件说明氯化三苯基四氮唑(TTC)被脱氢酶还原生成红色TTF的原理,给出TTC标准曲线制作、根尖样品与TTC及磷酸缓冲液等量混合液暗保温、乙酸乙酯提取与比色测定的操作步骤,并列出四氮唑还原强度的计算公式。

根系活力测定实验封面,标示实验主题与TTC还原法测定根系脱氢酶活力的内容
实验目的H2O无机盐合成氨基酸和植物激素,(ABA、CTK、GA等)根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量测定根系活力,为植物营养研究提供依据
实验原理氯化三苯基四氮唑,(TTC)是标准氧化电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙(TTF)
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第1页:根系活力的测定[TTC法]

根系活力的测定[TTC法]

第2页:实验目的H2O无机盐合成氨基酸和植物激素

一、实验目的H2O无机盐合成氨基酸和植物激素(ABA、CTK、GA等)根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量测定根系活力,为植物营养研究提供依据。理解植物根系活力的内涵掌握根系活力测定的原理与方法

第3页:实验原理氯化三苯基四氮唑

二、实验原理氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙(TTF)。生成的TTF比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化

第4页:TTCTTF根系活力脱氢酶丙二酸碘乙酸琥

TTCTTF根系活力脱氢酶丙二酸碘乙酸琥珀酸延胡索酸苹果酸促进抑制(无色,溶于水)(红色,不溶于水)

第5页:实验材料水培或砂培小麦、玉米等植物根系

三、实验材料水培或砂培小麦、玉米等植物根系。

第6页:TTC标准曲线配制用量

下表为TTC标准曲线的配制用量,用于根系活力测定中四氮唑还原量的查算。

TTC标准曲线的配制与TTC含量对照
TTC标准液加入量(mL)TTC含量(μg)
0.2525
0.5050
1.00100
1.50150
2.00200

说明:源文本中体积与含量两组数字粘连,按排列顺序一一对应还原,建议对照原图复核。

第7页:实验步骤—测定根系活力0.5g根尖样品

四、实验步骤—测定根系活力0.5g根尖样品0.4%TTC和磷酸缓冲液的等量混合液10ml根充分浸没于溶液中37℃下暗保温1~3h加入1mol/L硫酸2ml取出根吸干水分与3~4ml乙酸乙酯和少量石英砂在研钵内磨碎红色提取液移入试管且用乙酸乙酯定容到10ml空白试验作参比测485nm下吸光度与此同时做一空白实验,先加硫酸,再加根样品,其他操作同上查标准曲线,求四氮唑还原量

第8页:实验结果=四氮唑还原强度

五、实验结果=四氮唑还原强度(mg/g(根鲜重)/h)四氮唑还原量(mg)[根重(g)×时间(h)]

第9页:思考题

  • 思考题
  • 植物的根与地上部分有何关系?
  • 反应中加入硫酸、琥珀酸或延胡羧酸、苹果酸各起何作用?
  • 测定根系活力时最好选择根的哪个部位?为什么?
  • 为什么要以杀死根系作为空白对照?
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