页数：19页文件大小：1.91 MB来源： 植物生理学ppt课件
本实验课件先厘清外植体、脱分化、再分化与试管苗等组织培养概念，说明植物细胞全能性原理，再给出烟草叶片的灭菌接种、愈伤组织诱导与再分化培养步骤、结果观察要点，并列出MS培养基各类母液的配制用量与注意事项。
植物激素对愈伤组织形成和分化的影响
植物组织培养一些的概念外植体（explant）：在植物组织培养过程中，从植物体上被分离下来的，接种在培养基上，供培养用的原生质体、细胞、组织、器官等成为外植体。愈伤组织（callus）：植物受伤后的伤口处或在植物组织培养中外植体切口处不断增殖产生的一团不定形的薄壁组织。
脱分化（dedifferentiation）：指已分化的组织又恢复到无分化的状态。在组织培养过程中，将已经分化的茎、叶、花等外植体进行培养，令其形成愈伤组织，回到没有分化的状态，称为脱分化。
再分化（redifferentiation）：指在植物组织培养中，对处于脱分化状态的愈伤组织进行培养，诱导其形成新的植物体的过程。植株再生（plant regeneration）：指通过组织培养技术将植物的细胞、组织、器官培养成完整植株的过程。
试管苗（test-tube plantlet）：指在无菌条件下的人工培养基上，对植物细胞、组织或器官进行培养所获得的再生植株。初代培养（primary culture）：指在组织培养过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段。
继代培养（subculture）：在组织培养过程中，当外植体被接种一段时间后，将已经形成愈伤组织或已经分化根、茎、叶、花等的培养物重新切割，转接到其它培养基上以进一步扩大培养的过程称为继代培养。
二、实验原理植物细胞具有全能性：即每个植物细胞包含着能产生完整植株的全部遗传基因。从理论上讲，只要条件合适，包含着全部遗传基因的细胞都能分裂分化，产生完整的植株。植物激素在细胞分化中的作用
细胞分裂素和生长素的量影响组织块的分化方向促进芽的分化
三、实验材料烟草叶片
四、实验步骤：植物体分离灭菌外植体、接种培养脱分化④细胞分裂形成愈伤组织再分化形成胚状体⑤幼根、幼芽小植株①培养基的配制②灭菌③接种：④保温培养组培的一般过程
①培养基的配制: MS ②灭菌高温高压灭菌法培养基消毒压力为0.9~lkg／cm2 ，消毒20min 。玻璃器皿及用具、无菌水消毒应适当增加压力和延长时间，一般为1.2~1.3kg/cm2，30~50min。
③接种：接种室消毒接种的程序：自来水70%乙醇0.1%升汞无菌水材料数次30S 8min冲洗漂洗消毒冲洗解剖刀镊子3～4次小块培养基封口包扎切割转移消毒时间的长短，因所用消毒剂的种类和植物材料的不同而异切块的大小和形状没有严格限制，不能太小，亦不能过大
④保温培养将三角瓶或试管等，放在保温箱或培养室中去培养，培养室一般采用人工光照。本次实验培养室温度20~25℃，用40W日光灯提供光源，培养2 ~3周。
矿质盐类配方用量mg/L实际用量mg/L母液扩大倍数每升培养基用量ml大量元素NH4NO 31 ,650 1650010母液①100KNO31 ,900 19000CaCl2·2H 2O （单独配制）440 4400MgSO4·7H 2O 370 3700KH2PO 4170 1700微量元素KI 0.83 83100母液②10H3BO 36.2 620MnSO4·4H2O 22.3 2230ZnSO4·7H2O 10.6 1060Na2MOO4·2H2O 0.25 25CuSO4·5H2O 0.025 2.5COCl 2·6H2O 0.025 2.5表1：MS培养基的矿质成分和母液配制
铁盐Na 2EDTA 37.3 3730100母液③10FeSO 4·7H 2O 27.8 2780有机成分肌醇100 10000100母液④10烟酸0.5 50盐酸吡哆醇0.5 50盐酸硫胺素0.4 40甘氨酸2.0 20矿质盐类配方用量mg/L实际用量mg/L母液扩大倍数每升培养基用量ml激素类物质：α-萘乙酸和激动素（KT）：配制浓度都为0.1mg/ml。
3.培养基的制备：母液①：50ml母液②：5ml 烧杯母液③：5ml母液④：5ml定容pH 琼脂蔗糖15g 500ml 5.8 加热5g分装CaCl 2溶液50ml两种激素各10ml
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