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20 植物组织中超氧物歧化酶活性的测定.ppt

页数:7页文件大小:167.5 KB来源: 植物生理学ppt课件

本实验课件依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑在光下还原的原理测定酶活性,介绍以绿豆芽下胚轴为材料、核黄素—甲硫氨酸—NBT反应体系的配制、照光与暗对照管的设置,以及按光密度值计算SOD总活性的公式。

SOD活性测定实验封面,标示实验主题与氮蓝四唑光还原抑制法的内容
实验目的掌握SOD酶活性测定方法,掌握分光光度计、光照培养箱、冷冻离心机使用方法
实验原理因此光还原反应后,反应液蓝色愈深说明酶活性愈低,反之酶活性愈高。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性大小
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第1页:植物组织中超氧物歧化酶活性的测定

植物组织中超氧物歧化酶活性的测定

第2页:实验目的掌握SOD酶活性测定方法

一、实验目的掌握SOD酶活性测定方法。掌握分光光度计、光照培养箱、冷冻离心机使用方法。

第3页:实验原理因此光还原反应后

二、实验原理因此光还原反应后,反应液蓝色愈深说明酶活性愈低,反之酶活性愈高。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性大小。核黄素被氧化物质还原的核黄素氧氮蓝四唑蓝色的化合物(560nm)2 + 2H+H2O2+ O2SOD

第4页:实验材料绿豆芽下胚轴

三、实验材料绿豆芽下胚轴

第5页:实验步骤试剂

  • 实验步骤试剂(酶)用量(ml)终浓度(比色时)0.05mol/L磷酸缓冲液130mmol/L Met溶液750μmol/L NBT溶液100μmol/L EDTA-Na2液20μmol/L核黄素酶液蒸馏水30.60.60.60.60.20.413mmol75μmol10μmol2.0μmol对照管加缓冲液代替酶液总体积6.
  • 酶液提取
  • 显色反应表1 各溶液加入量
  • SOD活性测定

第6页:实验结果计算SOD总活性=单位

五、实验结果计算SOD总活性=单位:酶单位/g鲜重表示;Ack―照光对照管的光密度值;AE—样品管的光密度值;V—样液总体积(ml);a—测定时样品用量(ml);W—样重(g);

第7页:思考题

  • 思考题
  • 在SOD测定中为什么设暗中和照光两个对照管?
  • 影响本实验准确性的主要因素是什么?应如何克服?
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