16 植物组织或器官中丙二醛含量的测定 .ppt

第1页：植物组织或器官中丙二醛含量的测定

植物组织或器官中丙二醛含量的测定

第2页：实验目的

• 实验目的
• 掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法
• 了解丙二醛积累对细胞的伤害

第3页：实验原理：硫代巴比妥酸TBA丙二醛3,

二、实验原理：硫代巴比妥酸TBA丙二醛3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川）逆境膜脂的过氧化作用丙二醛酸性粉红色

第4页：实验材料：受干旱、高温

三、实验材料：受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官（以正常条件下的作为对照）：

第5页：实验仪器：紫外可见分光光度计离心机

实验仪器：紫外可见分光光度计离心机

第6页：实验步骤：1 MDA的提取称2g叶片

四、实验步骤：1 MDA的提取称2g叶片，加入5ml 磷酸缓冲液（50mmol，pH值为7.8）及少量石英砂，于冰浴中研磨提取，匀浆液以12000g 离心力作用下（4度）离心10min，其上清液即为MDA提取液。

2 MDA的测定取1ml MDA提取液，加3ml 27％三氯乙酸和1ml 2%TBA。混和液在95度水浴中保温30min后，立即置于冰浴中冷却，然后离心10min，于波长532nm和600nm下测定OD值。

第7页：结果计算以测得的OD532减去

• 结果计算以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，按155mmol-1cm-1消光系数计算MDA含量。分别计算衰老和对照组的值。MDA浓度(μmol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450 MDA含量(μmol/g FW)＝D4
• D5
• D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的光密度值

第8页：注意事项：1.0.1-0.5％的三氯乙酸

• 注意事项：1.0.1-0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高；
• MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降；
• 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机离心
• 低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+（最终浓度为0.5 nmol·L-1）
• 可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰

第9页：思考题

• 通过丙二醛含量测定能够解决什么理论和实际问题？
• 说明膜脂过氧化作用的对植物的影响
• TBA为什么要溶解在三氯乙酸中？
• 为什么要测定反应液在600nm下的吸光度？
• 丙二醛反应液为什么加热时间过长会影响测定结果？
• 如果可溶性糖含量影响丙二醛含量的测定，你有什么办法消除其影响？
• 正常植物与衰老时相比丙二醛含量有什么变化，分析其原因