13 第八章 吸光光度法(3-4节).ppt

第1页：摩尔吸光系数与灵敏度

8.3 吸光光度法的灵敏度与准确度一. 灵敏度的表示方法:摩尔吸光系数()A= b c =A/bc(L·mol-1·cm-1)越大, 灵敏度越高: 104～5×104 为中等灵敏度;>105为高灵敏度; <104为低灵敏度.

第2页：例1 邻二氮菲测铁

例1 邻二氮菲光度法测铁(Fe)=1.0mg/L, b=2cm , A=0.38 计算和解：c(Fe)=1.0 mg/L=1.0×10-3/55.85 =1.8×10-5mol/L

第3页：例1 浓度换算

c =1.0mg/L=1.0×10-3 g /1000mL= 1.0×10-4g/100mL

第4页：仪器测量误差

二. 准确度—仪器测量误差光度计的读数误差一般为0.2～2％(ΔT),由于T与浓度c不是线性关系，故不同浓度时的ΔT引起的误差不同。100806040200T%c1c2c3TTT-透光率读数误差cc1c1c2c2c3c3><

第5页：适宜测量范围

1086420204060800.70.40.20.1AT%Er(36.8)0.434浓度测量的相对误差与T(或A)的关系实际工作中，应控制T在10～70％,A在0.15～1.0之间(调c, b, )

第6页：显色剂与显色反应

8.4 显色反应与分析条件的选择：：：：助色团－NH2，－OH，－X （孤对电子）ne8.4.1 显色剂与显色反应O生色团：－N＝N－，－N＝O，OC=S,－N （共轭双键）πe无机显色剂: SCN-[Fe(SCN)]2+H2O2[TiO·H2O2]2+有机显色剂:

第7页：有机显色剂的结构类型

有机显色剂CH3－C－C－CH3HO－N N－OH＝＝NNOHCOOHSO3HOO型：NNNOHOHON型：PARNHNHNSNS型：双硫腙NN型：丁二酮肟邻二氮菲磺基水杨酸

第8页：显色反应的选择

显色反应的选择

• *灵敏度高，一般ε>104
• *选择性好
• *显色剂在测定波长处无明显吸收。对照性好, λmax>60 nm .
• *反应生成的有色化合物组成恒定，稳定。
• *显色条件易于控制，重现性好。

第9页：显色剂用量的确定

8.4.2 显色条件的确定c(R)c(R)c(R)1. 显色剂用量（c(M)、pH一定）Mo(SCN)32+浅红Mo(SCN)5橙红Mo(SCN)6-浅红Fe(SCN)n3-n

第10页：显色反应酸度的确定

2. 显色反应酸度（c(M)、c(R)一定）pH1

第11页：邻二氮菲亚铁与pH

邻二氮菲－亚铁反应完全度与pH的关系Fe2++3RH＋H＋A柠檬酸c(R)≈[R´]=10-4mol·L-1β3＝1021.3β3FeR3

第12页：适宜酸度范围结论

无法显示该图片。pH3～8为适宜的酸度范围

第13页：显色温度与时间

3. 显色温度及显色时间另外，还有介质条件、有机溶剂、表面活性剂等T1(℃)T2(℃)t(min)A

第14页：干扰的化学法消除

8.4.3 干扰及消除Co2＋,Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2 (蓝)⑴NaFSCN－Co2+Fe2+,Sn4+

• (2)Sn2+Co(SCN)2SCN－测Co2＋(含Fe3+) : (掩蔽法)
• 1.化学法

第15页：控制酸度与分离法

Co2+, Zn2+,Ni2+, Fe2+CoR,ZnRNiR,FeRCoR, Zn2+,Ni2+, Fe2+钴试剂RH+测Co2＋:(生成络合物性质不同)如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干扰，则需采取分离法。测Fe3＋:(控制pH)Fe3+, Cu2+FeSS （紫红）Cu2+pH 2.5SS

第16页：物理法选择测定波长

2. 物理法—选择适当的测定波长515655415500钍-偶氮砷III钴-亚硝基红盐AA络合物络合物试剂试剂

第17页：参比溶液的选择

• 1. 仅络合物有吸收，溶剂作参比。如phen—Fe2+标准曲线
• 2.待测液也有吸收，被测液作参比。如测汽水中的Fe3. 显色剂或其他试剂也有吸收，空白溶液作参比例:邻二氮菲光度法测Li2CO3中的Fe，参比溶液为不含Li2CO3样品的所有试剂。
• 4. 干扰组分与显色剂有反应,又无法掩蔽消除时：
• 1）掩蔽被测组分，再加入显色剂，作参比.2）加入等量干扰组分到空白溶液中,作参比.--选择适当的参比溶液

第18页：单一组分的测定

8.5 吸光光度法的应用

• 1. 单一组分测定
• 1) 金属离子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟, Co-钴试剂
• 2) 磷的测定: DNA中含P～9.2%, RNA中含P～9.5%, 可得核酸量.H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3=(NH4)3PO4·12MoO3+12NH4NO3+12H2O磷钼黄(小)磷钼(V)蓝(大)Sn2+

第19页：水质检测与药物测定

• 3) 蛋白质测定—溴甲酚绿、考马司亮蓝等
• 4) 氨基酸测定—茚三酮(紫色化合物)
• 5) 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+----6) 药物含量测定—比吸光系数定量；荷移光谱法测定.7) 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。

第20页：多组分的测定

2. 多组分的测定xl1, eyl1, exl2, eyl2由x,y标液在1, 2处分别测得a)在1处测组分x, 在2处测组分yb) 在1处测组分x; 在2处测总吸收,扣除x吸收,可求yc) x,y组分不能直接测定A1=exl1bcx+ eyl1bcy(在1处测得A1)A2=exl2bcx+ eyl2bcy(在2处测得A2)

第21页：光度滴定

3. 光度滴定NaOH滴定对硝基酚pKa=7.15间硝基酚pKa=8.39pKa =1.24V1V2V(NaOH)/mL对硝基酚间硝基酚酸形均无色.碱形均黄色

第22页：典型光度滴定曲线

典型的光度滴定曲线依据滴定过程中溶液吸光度变化来确定终点的滴定分析方法。Vsp滴定剂吸收Vsp被滴物吸收Vsp滴定剂与待测物均吸收Vsp产物吸收

第23页：摩尔比法测络合物组成

• 4. 络合物组成的测定
• (1)摩尔比法: 固定cM,改变cR1:13:1c(R)/c(M)A1.0 2.0 3,0

第24页：等摩尔连续变化法

(2)等摩尔连续变化法:M:R=1:10.50.33cM/ccM/cM:R=1:2

第25页：表观形成常数的测定

表观形成常数的测定(设M、R均无吸收)0.5cM/cM:R=1:1A0Ac(M)=c(R)=cMmRn型?

第26页：一元弱酸离解常数的测定

5.一元弱酸离解常数的测定p330HL H＋＋LKa＝[H+][L]/[HL]高酸度下，几乎全部以HL存在，可测得AHL＝εHL·c(HL)；低酸度下，几乎全部以L存在，可测得AL ＝εL·c(HL).代入整理：[HL][L]或配制一系列c相同,pH不同的溶液,测A.

第27页：甲基橙的吸收曲线

MO吸收曲线Aa(HL)Ab(L)123456Ab654321Aa350400450500550600/nmA曲线pH11.10, 1.3822.6533.0643.4853.9865.53,6.80由每份溶液的一对pH、A，可求得一个Ka, 取平均值即可.

第28页：MO离解常数作图法

MO离解常数的测定作图法AHL3.32(pKa)123456ApH=pKapHAL0.60.40.20-0.2-0.4-0.63.04.0pH3.34

第29页：双波长分光光度法

6. 双波长分光光度法消除干扰(不要求)在2，A2=Ax2+Ay2在1，A1=Ax1+Ay1A= A2-A1=Ax2+Ay2–(Ax1+Ay1)=Ax2 –Ax1= AxAy2＝Ay1Ax =(x2－x1)bcx消除了y的干扰X被测Y干扰211Ay1AX1Ay2AX2A/nm´

第30页：双波长法消除浑浊背景

双波长分光光度法消除浑浊背景干扰1 2AA1-A2= △A△A∝c例牛奶中微量Fe的测定

第31页：导数分光光度法

7. 导数分光光度法(不要求)A~图混合物导数光谱01234

第32页：常药降压片的测定

常药降压片中氢氯噻嗪含量的测定

• 1.氢氯噻嗪.2.硫酸双肼肽嗪
• 3. 盐酸可乐定
• 4.常药降压片250 290 330 412312A

第33页：肝中杀鼠剂的测定

肝中茚满二酮类抗凝血杀鼠剂的固相萃取方法：肝匀浆用乙腈浸提，浸提液用6％的HClO4稀释，然后用GDX100大孔树脂萃取，用二氯甲烷5mL洗脱杀鼠剂，40℃挥干，剩余物用0.1mol·L-1NaOH4mL溶解后，紫外导数光谱测定。A0.0cdabDa.空白肝普通光谱b.2.5 mg/L敌鼠溶液的普通光谱c.空白肝二阶导数光谱d.2.5 mg/L敌鼠溶液的二阶导数光谱

第34页：第八章小结

8.1了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系.吸收曲线—定性分析的基础。定量分析的基础—朗伯-比尔定律：A=bc=-lgT式中各参数的物理意义，定量计算。8.2了解目视比色法、分光光度法的特点，分光光度计的基本部件。8.3灵敏度的表示—摩尔吸光系数的意义和计算；准确度—适宜的测量范围、偏离比尔定律的原因。8.4显色反应及条件的确定:显色剂用量、酸度、时间、温度、干扰及消除。8.5应用:单一组分测定示例、多组分测定、光度滴定、络合物组成的测定、酸碱离解常数的测定。第八章小结

第35页：课程收尾页

新年快乐！