第1页：实验三 霉菌的形态观察
实验三 霉菌的形态观察
一、实验目的
- 了解根霉、青霉、毛霉及曲霉的形态构造。
- 学会霉菌的载玻片培养法。
- 进一步熟练显微镜的使用技术。
第2页：实验三菌种与器材
二、实验材料
- 菌种：黑曲霉、产黄青霉、腐乳毛霉、黑根霉。
- 培养基：察氏培养基。
- 其他：显微镜、培养箱、培养皿、水浴锅、乳酸石炭酸棉蓝染色液、载玻片、盖玻片、无菌水、接种环、接种钩、解剖针、酒精灯、火柴、滤纸、玻璃铅笔等。
第3页：霉菌形态观察原理
三、实验原理
霉菌为真核微生物，菌丝较粗大，有分枝或不分枝；菌丝体无色透明或暗褐色至黑色，或呈现鲜艳颜色。显微镜下观察时菌丝皆呈管状，在固体培养基上生长为绒毛状或棉絮状。一些较高等霉菌的丝状管道中皆有横隔，由横格状菌丝隔成许多细胞。
- 乳酸石炭酸棉蓝染色液的作用
- 细胞易收缩变形、孢子容易分散，故制标本时常用该染色液：可使细胞不变形，具有防腐杀菌作用，不易干燥、能保持较长时间，溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。
第4页：载玻片培养法与玻璃纸透析培养法
为得到清晰、完整并保持自然状态的霉菌形态，还可利用载玻片培养法或玻璃纸透析培养法进行观察。
- 载玻片培养法
- 在一定湿度的培养皿中放入霉菌载片培养物并盖上盖玻片，使霉菌在狭窄空隙中生长繁殖，便于观察曲霉的足细胞、分生孢子、顶囊等特殊构造，还可在同一标本上观察不同阶段的生长发育状况。
- 玻璃纸透析培养法
- 利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，再取一小片贴放在载玻片上镜检。
本实验以制片观察和载玻片培养观察为主。
第5页：制片观察法
四、操作方法
（一）制片观察法
- 于洁净载玻片上滴一滴乳酸石炭酸棉蓝溶液，用解剖针或接种钩从菌落边缘处取少量带孢子的菌丝于染色液中，细心把菌丝挑散开，再用盖玻片盖上，注意不要产生气泡。
- 置于显微镜下观察霉菌的形态。
第6页：无菌培养皿的准备
（二）载玻片培养观察法
1. 无菌培养皿的准备：在一洁净干燥的培养皿内放一铝丝制载玻片架，再放入分别用纸包好的洁净载玻片 1～2 片及盖玻片 1～2 片，然后盖上皿盖，包扎后灭菌备用。
第7页：载玻片培养物的制备
2. 霉菌载玻片培养物的制备
- 取约 3 ml 经灭菌后的察氏培养基试管，标上青（毛、根或曲）霉字样。
- 以无菌操作方式取出无菌培养皿中的载玻片和盖玻片，打开备用。
- 取一标好字样的试管培养基，于酒精灯上以微火融化。
第8页：接种培养与镜检
2. 霉菌载玻片培养物的制备（续）
- 待融化后的培养基冷却至 45 ℃左右时，接入标明菌名的相应霉菌孢子一环，搅拌均匀，立即取大约 3～4 环于载玻片中央，迅速盖上无菌盖玻片，并于载玻片右上角标明菌名。
- 往培养皿中倒入约 3 ml 的无菌水。
- 将制备好的载玻片置于培养皿中的玻片架上，盖上皿盖，置于 28 ℃培养箱中培养 48～72 h，取出后置显微镜下观察霉菌形态。
数据修正：源文件此处温度作「45t」，按培养操作标准应为 45 ℃。
第9页：黑曲霉平板培养物的制备
3. 黑曲霉平板培养物的制备
- 在水浴锅中融化大试管察氏培养基 1 管。
- 将融化的培养基以无菌操作方式注入已灭菌的空培养皿中，待凝。
- 于上述培养皿中央点上黑曲霉孢子少许。
- 置于 28 ℃培养箱内培养 48 h 后取出，用低倍镜观察曲霉的足细胞和匍匐菌丝。
数据修正：源文件此处温度作「28t」，按培养条件标准应为 28 ℃。
第10页：玻璃纸透析培养观察法
（三）玻璃纸透析培养观察法
- 向霉菌斜面试管中加入 5 ml 无菌水洗下孢子，制成孢子悬液。
- 用无菌镊子将已灭菌的、直径与培养皿相同的圆形玻璃纸覆盖在察氏培养基平板上。
- 用 1 ml 无菌移液管吸取 0.2 ml 孢子悬液于上述玻璃纸平板上，并用无菌玻璃棒涂抹均匀。
- 置于 28 ℃培养箱内培养 48 h 后取出培养皿，打开皿盖，用镊子将玻璃纸与培养基分开，再用剪刀取一小片置于载玻片上，用显微镜观察其特殊形态。
数据修正：源文件此处温度作「28t」，按培养条件标准应为 28 ℃。
第11页：实验三思考题与作业
五、思考题及实验作业
- 你能否通过显微镜观察，区分出上述四类霉菌？
- 将显微镜下所观察到的各种霉菌的形态结构描绘出来，并注明名称。
- 列表比较各种霉菌在形态结构上的异同。
- 比较酵母菌、细菌、霉菌形态上的异同。
