09 四 食品微生物检验染色法.ppt

第1页：食品微生物检验染色法

四、食品微生物检验染色法

微生物中细菌、致病菌是很小的生物体，必须通过染色的方法在显微镜下才能看得清楚，并且还可以通过染色的方法鉴别革兰氏染色特性，以及是否长有鞭毛、周毛、荚膜和芽孢等。

第2页：美蓝染色法

1. 美蓝染色法

（一）吕氏碱性美蓝染色液

吕氏碱性美蓝染色液配方

成分	用量
美蓝	0.3 g
95% 乙醇	30 ml
0.01% 氢氧化钾溶液	100 ml

配法：将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。

（二）染色法

将涂片在火焰上固定，待冷却后滴加染液，染 1～3 min，水洗，待干，镜检。

（三）结果

菌体呈蓝色。

第3页：革兰氏染色液的配制

2. 革兰氏染色法

（一）染色液

• 结晶紫染色液：将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
• 革兰氏碘液：将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后再加蒸馏水至 300 ml。

第4页：沙黄复染液与初染媒染

c. 沙黄复染法

• 配方：沙黄 0.25 g、95% 乙醇 10 ml、蒸馏水 90 ml；将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。

（二）染色法

1. 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染 1 min，水洗。
2. 滴加革兰氏碘液，作用 1 min，水洗。

第5页：脱色复染与结果判定

（二）染色法（续）

3. 滴加 95% 乙醇脱色，约 30 s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色 10 s。
4. 水洗，滴加复染液，复染 1 min，水洗，待干，镜检。

（三）结果

革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

注：亦可用 1∶10 稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需 10 s。

第6页：耐酸性染色液的配制

3. 耐酸性染色法（萎—倪二氏法）

（一）染色液

配法：将品红溶解于乙醇中，然后与苯酚溶液混合。

文字修正：源文件此处作「浓烟酸 3 ml」，按耐酸性染色法标准配方应为浓盐酸 3 ml。

第7页：耐酸性染色法步骤与结果

（二）染色法

1. 将涂片在火焰上固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸汽出现（切不可使沸腾）；染液因蒸发减少时应随时添加。染 5 min，倾去染液，水洗。
2. 滴加盐酸-乙醇脱色，直至无红色脱落为止（所需时间视涂片厚薄而定，一般 1～3 min），水洗。
3. 加吕氏碱性美蓝染色液，复染 30 s～1 min，水洗，待干，镜检。

（三）结果

耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。

第8页：柯氏染色法

4. 柯氏染色法

（一）染色液

0.5% 沙黄液；0.5% 孔雀绿液。

（二）染色法

1. 将涂片在火焰上固定，滴加 0.5% 沙黄液，并加热至出现气泡，约 2～3 min，水洗。
2. 滴加 0.5% 孔雀绿液，复染 40～50 s，水洗，待干，镜检。

（三）结果

布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。

第9页：奥尔特氏荚膜染色法

5. 奥尔特氏荚膜染色法

（一）染色液

沙黄 3 g、蒸馏水 100 ml，用乳钵研磨溶解。

（二）染色法

将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸汽后继续染 3 min，水洗，待干，镜检。

（三）结果

炭疽芽孢杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。

第10页：瑞氏染色法

6. 瑞氏染色法

（一）染色液

瑞氏色素 0.1 g、甲醇 60 ml，用乳钵研磨溶解。

（二）染色法

1. 待涂片自然干燥后，滴加染色液，固定 1 min。
2. 加入等量蒸馏水（pH 6.5），染色 3～5 min。
3. 用蒸馏水冲洗，待干，镜检。

第11页：鞭毛染色液的配制

7. 鞭毛染色法

（一）染色液的配制

第12页：鞭毛染色操作要点

（一）染色液的配制（续）：在 90 ml 乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后继续滴加使其变为澄清，然后用其余 10 ml 乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止（此为关键性操作，应特别小心）。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡；染液当天配、当天使用，2～3 d 后基本无效。

（二）染色法：在风干的载玻片上滴加甲液，4～6 min 后用蒸馏水轻轻冲净，再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟（加热时注意勿出现干燥面），在菌体多的部位可呈深褐色到黑色；停止加热，用水冲净，干后镜检。菌体及鞭毛为深褐色到黑色。

第13页：染色法小结（一）

小结

1. 食品微生物检验方法是食品监测必不可少的重要组成部分，可衡量食品卫生质量，为卫生管理工作提供依据，保障人民的身体健康。
2. 食品微生物检验包括生产环境的检验、原辅料检验、食品加工储藏销售诸环节的检验、食品的检验等内容。
3. 食品微生物检验指标主要有菌落总数、大肠菌群、致病菌、霉菌及其毒素等。

第14页：染色法小结（二）

小结（续）

4. 食品微生物检验的一般程序包括：检验前准备、样品的采集与处理、样品的送检与检验、检验、结果报告等。
5. 染色是强化细胞或细胞组分与周围环境之间的反差，便于利用普通光学显微镜观察微生物细胞的简捷方法。染色的制片过程一般包括涂片、干燥、固定、染色、水洗、干燥等基本步骤。

第15页：染色法思考题

思考题

1. 简述革兰氏染色与细菌细胞壁结构的关系。
2. 说明革兰氏染色的操作步骤。当对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样确证你的染色操作正确、结果可靠？