28 实验七 动物试验法.doc

第1页：实验七 动物试验法

• 实验七动物试验法目的要求掌握实验动物的保定、接种、采血以及剖检的方法
• 在微生物实验研究中，除了应用形态学、生物学和血清学检查外，有时动物试验也很重要
• 通常它可用于鉴别分离病原微生物、病原微生物毒力的测定及毒力的增强或减弱、制备诊断血清、疫苗、抗毒素及补体
• 微生物学实验室常用的实验动物有家兔、豚鼠、小白鼠等
• 操作步骤
• 一、实验动物保定法
• 一）小白鼠保定法先用右手抓住尾巴，提起后肢，令其前爪抓住饲养笼的铁丝盖，然后用左手的拇指和食指捏住两耳及头顶部皮肤，并翻转左手，背部皮肤固定于左手中指、图7-1小白鼠的保定及注射无名指及拇指基部之间，以小指压住其尾根，小白鼠即仰卧保定于左手上，消毒术部后，即可进行注射，见图实7-1
• 二）豚鼠保定法助手用左手拇指挟住豚鼠右前肢基部，用食指和中指挟住左前肢，然后用右手紧握其腹部和两后肢，使其腹部朝上，术者即可进行注射，见图实7-2
• 图7-2豚鼠的保定及心脏采血
• 三）家兔保定法较小的家兔,基本上和豚鼠的保定法一样，但大家兔须用仰卧或保定器保定
• 如果进行耳静脉注射，让家兔卧在手术台上，由助手把握住前后躯即可
• 也可用筒式金属保定器保定（见图实7-
• 3）
• 二、实验动物接种法接种时，使用干热灭菌的注射器
• 吸取接种材料时，吸取量应比使用量稍多些
• 注射器内不可留有气泡，吸取接种物后，倒转注射器使针头向上，在针头上插一个无菌棉花球，使注射器内气泡上升，并慢慢推出，再将此棉球投入煮沸消毒器内，或予以焚烧
• 注射器用过后，先在煮沸消毒器内吸水冲洗一次，再将针头用镊子取下，注射器拔出筒心后，一并放入煮沸消毒器内，进图7-3家兔的保定及静脉注射

第2页：行煮沸消毒

• 行煮沸消毒，然后将其洗净备用
• 接种部位，先进行去毛（剪毛或剃毛），再以碘酒或酒精进行局部消毒
• 接种后，针头拔出处，应以酒精棉球轻轻按压片刻，以防注射物外溢
• 一）皮下接种注射部位，多选择腹股沟、腹壁中线或背部，局部去毛消毒后，用左手拇指和食指将局部皮肤提起，右手将注射器针头刺入提起的皮肤下，然后左手放松，将接种物缓缓注入，此时可见在注射处皮肤有片状的隐起，迅速拔针头，并以酒精棉球压按片刻，防止注射物外溢
• 小白鼠皮下注射时，左手保定，右手操作局部消毒，把持注射器，以针头稍微挑起腹股沟皮肤插入皮下，注射时见有水泡微微鼓起即表示注入皮下
• 二）皮内接种术者以左手拇指及食指夹起皮肤，右手持注射器，用1ml注射器附以最小号针头（5号针头），针头插入拇指与食指之内的皮肤内，针头插入不宜过深，同时针头刺入角度要小，即与夹起的皮肤平行，注射时感到有阻力，且注射完毕后皮肤上有小硬疱为注入皮内的表现
• 皮内注射要慢，否则容易使皮肤胀裂或自针孔流出注射物而散播传染
• 注射量一般为
• 0.1～
• 0.2ml
• 三）肌肉接种注射部位，以腿部肌肉为宜，若为鸟类则以胸侧肌肉为宜
• 由一人抓住实验动物，局部去毛消毒后，另一人将针头刺入肌肉层内，缓缓将接种物注入
• 注射量视动物大小而定，一般为
• 0.2～1ml
• 四）腹腔内接种腹腔接种，宜采取仰卧保定
• 接种时其后躯稍抬高使其内脏倾向前腔，接种部位在腹后侧面，针头先插入皮下，后进入腹腔，注射时应无阻力，注射后皮肤应无疱隆起
• 五）静脉接种
• 1.家兔注射部位以耳外缘静脉为宜，若作多次注射，应先从耳尖部开始，以免因注射造成血管栓塞，致使下次注射不能再利用该血管
• 为便于注射,轻弹兔耳、酒精涂擦及助手以拇指、食指紧压耳根部，可使家兔耳边静脉扩张隆起
• 注射时，术者左手执兔耳，右手持针，以与静脉平行方向刺入静脉，同时助手放松其紧压手指，以便血液流通
• 注射时无阻力且有血向前流，即表示注入静脉，缓缓注射，注射完针头拔出后，用消毒棉球紧压针孔片刻，以免血或注射物溢出
• 2.豚鼠豚鼠静脉内接种比较困难，因为豚鼠没有裸露明显的静脉可寻，若必须作静脉注射时，使豚鼠伏卧保定，并施以全身麻醉，选后腿下部外侧静脉，将该处剪毛消毒，用锐刀切一长约1cm的切口，露出皮下静脉，用最小号针头，刺入静脉慢慢注入接种物
• 接种完毕，皮肤应缝合一两针
• 3.小白鼠注射部位为尾静脉，以体重15～20g为宜
• 注射前，将小白鼠尾巴以热水（60℃左右）棉球或酒精棉球擦拭，使静脉扩张
• 接种时用一玻璃漏斗扣住小白鼠，将尾巴拉出
• 实验者左手拉尾巴，右手持注射器，用小号针头刺入尾侧静脉，缓缓注入接种物，若注射无阻力，出现一条白线，表示注入到静脉内
• 六）脑内接种
• 1.小白鼠小白鼠脑内接种的应用比其它实验动物为多
• 注射时可先用乙醚作轻度麻醉，术者以左手固定头部，右手持锋利的短小针头连接结核菌素注射器，于两耳根连接线中点略偏左（或右），垂直刺入少许即可，缓缓注入接种物，以免突然增高颅内压力，注射量不超过
• 0.04ml
• 2.家兔和豚鼠脑内接种法基本和小白鼠相同，唯其颅骨较硬，最好事先用短锥先钻孔，然后用注射器接种，深度宜浅，否则易伤脑组织
• 注射量为
• 0.1～
• 0.2ml
• 凡作脑内接种后一小时内出现神经症状的动物作废，认为是接种创伤所致
• 三、实验动物采血法

第3页：如欲取得清晰透明的血清

• 如欲取得清晰透明的血清，宜于早晨没有饲喂之前抽取血液，采集的血液放37℃温箱或室温中让其凝固后，分离出血清
• 如利用全血，可直接接于含有抗凝剂的瓶内，或含玻珠的三角瓶内振荡脱纤防凝
• 采血的方法往往根据用血的不同目的，用血量的多少，而采用不同方法
• 一）家兔采血法家兔采血可采自耳静脉或心脏，耳边缘静脉采血保定和术式略同于静脉内接种，不过采时系以针尖与耳尖同向抽吸其血，这样一次可采取血液1～2ml
• 如果用大量血液，则应采取心脏采血法：动物应仰卧或由助手保定，或以绳索将四肢固定，术者在动物左前肢腋下处剪毛及局部消毒，在胸部心脏跳动最明显处下针
• 用一寸半长人用9号针头直刺深入至心脏，感到针头跳动或有血液向针管内流入时，即可抽血，一次可采血15～20ml
• 如为全取血，可自其颈动脉放血
• 先将动物仰卧保定，在其颈部剃毛消毒，动物稍加麻醉，用刀片在颈静脉沟内切一长口，露出颈动脉，结扎颈动脉，于近心端插入一玻璃导管，使血液自行流至无菌容器内
• 二）豚鼠采血法豚鼠采血一般皆来自心脏，其保定和术式同家兔心脏采血法
• 豚鼠采血，多用其血清作为补体，故采出血液后立即置于消毒过的干燥容器中，凝后析出血清
• 三）小白鼠采血法小白鼠一般用简易的断尾采血法
• 方法是将尾端消毒，用剪刀断尾少许，使血液流出，可得血液数滴，以供检验用
• 四）绵羊采血法绵羊用颈静脉采血
• 采用时，由一助手半坐骑在羊背上，两手各持其一耳（或角）或颚，令后退在两墙的夹角，尾靠住墙根，因为羊的习惯好后退
• 术者在其颈部上三分之一处剪毛消毒，一手压在静脉沟下部使静脉努张，右手持针头猛力刺入皮肤，熟练时即可同时刺入血管，此时血液流出，直接接纳于容器内，一切操作应尽量保持无菌和不被污染，以便获得无菌血液
• 每头成年绵羊每次可采200～400ml，休息两周后可再采
• 五）鸡采血法采少量血，可用鸡冠或翼下静脉采血
• 鸡冠采血，即剪破鸡冠一突起尖端，若需较大量血，还以采心血为好
• 助手将鸡固定于桌上，左胸朝上露出，用2寸长的20号针头连接上注射器，从胸骨脊的前端至背部下凹处连线的中点垂直刺入，约一寸深即可采得心血
• 鸡血极易凝固，采血用注射器事前应加有4％枸橼酸钠1份，采血4份即可防凝
• 四、实验动物尸体剖检法实验动物经接种后而死去或予以扑杀后，应对其尸体进行剖检，以观察其病变情况，并可取材保存或进一步作微生物学、病理学、寄生虫学、毒物学等的检查
• 一）先用肉眼观察动物体表情况，并留心观察接种部位有无变化
• 二）将动物尸体仰卧姿势放在铺有纸张的解剖板上，用钉将其四肢钉住，再放于一搪瓷盘中
• 三）用浸有3％来苏儿或碘酒、酒精棉球消毒颈、胸、腹部皮毛
• 四）以无菌剪刀自其颈部至耻骨部剪开皮肤，并将四肢腋窝处皮肤剪开，剥离胸腹部皮肤使其尽量翻向外侧，注意皮下组织有无出血、水肿等病变，观察腋下、腹股沟淋巴结有无病变
• 五）另换一套灭菌剪刀剪开腹肌和腹膜，但须注意不可损伤肠管和胃
• 观察腹腔内有无渗出液及其性状，观察腹腔内器官等有无变化，根据需要无菌采集材料进行培养和涂片检查
• 六）最后再换一套无菌剪刀剪开胸腔，观察心、肺有无病变
• 若作心血培养时，可将烙铁烧红在心包膜烧烙，再从此处用无菌毛细吸管或注射器抽吸心血直接培养或作涂片
• 七）必要时破颅取脑组织作检查
• 八）如欲作组织切片检查，则取各种组织小块置于10％福尔马林液中使之固定

第4页：九）剖检完毕

九）剖检完毕，将动物尸体，用垫在解剖板上的纸张包好，予以焚烧或高压灭菌，亦可浸入消毒药水中过夜，而后埋于深坑中，所用器械，均应煮沸消毒，实验台用3％来苏尔进行擦洗。