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19 第七章 核酸的生物合成.ppt

页数:51页文件大小:8.41 MB来源: 生物化学ppt课件

本课件围绕遗传信息的传递展开:先给出中心法则的定义与内容,再讲 DNA 的半保留复制及其生物学意义、复制的起始延长与终止、参与复制的酶与蛋白质;随后讲逆转录的过程与逆转录酶,最后讲 RNA 的生物合成途径、RNA 聚合酶、转录过程与 RNA 的复制。

生物化学课程封面,标注「解码生命奥密,服务农业生产」的课程定位
第七章 核酸的生物合成目录页,列出中心法则、DNA 复制、逆转录、转录与 RNA 复制
中心法则1.中心法则定义内容页,重点在早在1958年,Crick就提出了中心法则
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第1页:生物化学课程封面

生物化学解码生命奥密,服务农业生产。Biochemistry

第2页:第七章 核酸的生物合成

第七章核酸的生物合成本章内容
中心法则DNA的复制逆转录转录RNA的复制遗传信息的传递与表达已成为现代生物学最活跃的领域之一。

第3页:中心法则1.中心法则定义

一、中心法则1.中心法则定义
早在1958年,Crick就提出了中心法则。由DNA决定RNA分子的碱基顺序,又由RNA决定蛋白质分子的氨基酸顺序的理论。

第4页:中心法则内容DNARNA

2.中心法则内容DNARNA蛋白质复制翻译转录遗传信息储存在DNA上,以复制的方式传递给下一代。遗传信息表达为不同结构的蛋白质,行使不同的功能,表现不同的性状中心法则的最初内容:

第5页:蛋白质复制转录逆转录复制翻译

DNARNA蛋白质复制转录逆转录复制翻译完美形式的中心法则1970年美国生化学家Temin和Baltimore各自独立地发现了逆转录酶,该酶能以RNA为模板合成互补DNA,从而把病毒RNA分子中的遗传信息转移到宿主细胞的DNA分子中。人们还发现有些RNA病毒能够合成RNA复制酶,该酶能够催化RNA的自我复制,即这类病毒在宿主细胞中通过自身RNA的自我复制产生新的病毒颗粒。因此,Crick又提出了中心法则的完美形式。

第6页:基本概念

  • 3.基本概念
  • 复制:以原来DNA分子为模板合成出相同分子的过程。
  • 转录:在DNA分子上合成出与其核苷酸顺序相对应的RNA的过程。
  • 逆转录:以RNA为模板合成出DNA的过程
  • 翻译:在RNA的控制下,根据核苷酸链上每三个核苷酸决定一种氨基酸的规则,合成出具有特定氨基酸顺序的蛋白质肽链的过程。

第7页:的复制I.半保留复制1

二、DNA的复制I.半保留复制1.定义:子代DNA分子一条为亲代链,另一条链则是新合成的2.生物学意义:有助于遗传的稳定性3.实验证明亲代子代复制1958年,Meselson-stahl利用经15N标记的大肠杆菌DNA,首先证明了DNA的半保留复制。

第8页:子一代子二

子一代子二代

第9页:半保留复制机理图示

第10页:半保留复制机理DNA

DNA半保留复制机理DNA为什么会进行半保留复制?复制时,随着DNA两条链的逐渐解开,分别以解开的两条链为模板,按照碱基配对原则合成新的链,复制完成后,两条模板链完全分开,生成两个DNA分子。

第11页:参与原核生物DNA复制的

II.参与原核生物DNA复制的酶和蛋白质因子引物酶DNA聚合酶解螺旋酶(解链酶)单链DNA结合蛋白(SSB)DNA连接酶拓朴异构酶

第12页:引物酶的功能

  • 引物酶的功能:合成一段几个~十个核苷酸RNA片段作为引物,它关键的作用是为DNA聚合酶提供了一个自由的3`-OH 。
  • RNA引物作用:引发DNA的合成
  • 引物酶的结构组成较复杂,只有组成引发体后才具备活性引物酶

第13页:聚合酶的种

  • DNA聚合酶的种类:DNA聚合酶I,DNA聚合酶II,DNA聚合酶III
  • 聚合方向:5`→3`
  • DNA聚合酶的组成1.DNA聚合酶I:一条多肽链组成,胰蛋白酶处理后,裂解为大小两片段,大片段称为Klenow片段,具有5`→3`聚合活性;小片段具有5`→3`外切活性,主要负责切除引物。2.DNA聚合酶II:由四个亚基组成,酶活性较低。3.DNA聚合酶III:由多个亚基组成,α、ε、θ三亚基组成核心酶,α亚基具有5`→3`聚合活性;ε亚基具有3` → 5`外切活性,由校对功能;θ具有组建功能。DNA聚合酶

第14页:聚合酶的功能聚合酶III(聚合

DNA聚合酶的功能聚合酶III (聚合作用),聚合酶II (修复作用)聚合酶I (修补作用)

第15页:解螺旋酶(解链酶)这是一类能通过水解

解螺旋酶(解链酶)这是一类能通过水解ATP获得能量来解开DNA双链的酶。复制时,DNA解链酶可以沿着一条DNA模板链的5`→3`方向移动,将DNA双链解开。

第16页:单链DNA结合蛋白(SSB)

单链DNA结合蛋白(SSB)是一类特异性和DNA单链区结合的蛋白质。复制时,当解链酶解开双链DNA后,单链结合蛋白覆盖分开的两条DNA链,避免DNA重新形成双链。

第17页:连接酶DNA连接酶催化一个DNA

DNA连接酶DNA连接酶催化一个DNA链的5`-Pi与另一个DNA链的3`-OH形成磷酸二酯键,但是要求这两个链都必须与同一互补链结合,两个链必须是邻近的,如果缺少一个或一个以上核苷酸,此酶就不能将缺口封闭。AGG CAGCT C C GTCGT C C GTCGA G G AGCHERE !

第18页:随着DNA双链不断解开,将使DNA

随着DNA双链不断解开,将使DNA进一步产生超螺旋。如果让这些超螺旋传到DNA分子的末端才释放,那么对大肠杆菌而言,将使DNA以每分钟2万转的速度旋转,显而易见,这种情况在细胞中是不会发生的;而对于环状DNA分子来讲,还不能以这种方式来释放。因此,必须使超螺旋分子成为松驰的状态,这正是拓朴异构酶的作用。拓朴异构酶

第19页:拓朴异构酶使DNA超螺旋

拓朴异构酶使DNA超螺旋变为松驰态;它兼有内切酶和连接酶的活力,能迅速使DNA链断开后再接上。

第20页:复制时各种酶在DNA链上结合的

DNA复制时各种酶在DNA链上结合的模式图

第21页:复制的过程合成的方

III.DNA复制的过程合成的方向:5`→3`反应通式:(dNMP)n-3`-OH+dNTP→(dNMP)n+1-3`-OH+PPi原料:dNTP复制分三个阶段:1.起始2.延长3. 终止

第22页:起始

  • 1.起始
  • 起点:起点是一段特殊的序列所组成;原核生物只有一起点;真核生物有多个起点。
  • 起始过程:⒈首先,解螺旋酶利用水解ATP所释放的能量,解开DNA双螺旋,形成复制点。复制点的形状象个叉子,故称复制叉。

第23页:解螺旋酶解开双链

⒉解螺旋酶解开双链后,沿着模板链的5`→3`方向随着复制叉前进而移动,继续将DNA双链解开。此时,单链结合蛋白覆盖解开的两条单上,防止单链退火而重新形成螺旋,或防止形成链内氢键;而拓朴异构使超螺旋松驰下来。⒊引物酶结合在解开的DNA单链上,以DNA为模板、NTP为原料合成一段RNA引物。4.DNA聚合酶III 结合到模板链上,在引物的3`-端加上一个dNTP。

第24页:延长

  • 2.延长
  • DNA链延长:DNA聚合酶Ⅲ,5`→3`。
  • 半不连续复制:我们知道,DNA双螺旋是反向平等的,一条链是3` → 5`,则另一条链的方向就是5` → 3`。复制时,以亲代链3` → 5`为模板时,新链的合成方向是5` → 3`,能使新链持续延长,但另一条链5`→3`不能连续合成。
  • 冈崎片段复制时,不连续合成的小片段。
  • 前导链
  • 滞后链

第25页:复制叉上仅结合了一套DNA聚合III

复制叉上仅结合了一套DNA聚合III,前导链与滞后都是由同一套DNA聚合酶完成的。滞后的模板链要形成环,穿过DNA聚合酶才能保证两条链的合成方向均为5`→3`。

第26页:终止示意图

第27页:终止

  • 3.终止
  • 复制终点:通常是复制起点
  • DNA聚合酶I:切除引物,并填补空缺
  • DNA连接酶:将相邻的两个DNA片段连接起来

第28页:复制全过程

复制全过程

第29页:复制过程基本特点

  • DNA复制过程基本特点
  • 半保留复制
  • 有特定的起点(原核生物为单起点,真核生物为多起点)
  • 需要RNA作为引物,以后引物被切除,补上DNA
  • DNA合成方向是5`→3`
  • 复制可以是单向,也可以是双向,但速度不一定相等
  • 半不连续复制,有前导链(连续)和后滞链(不连续)之分

第30页:逆转录

  • 三、逆转录
  • 逆转录:以RNA为模板合成DNA的过程,即遗传信息从RNA传递到DNA。
  • 逆转录酶催化新链合成的方向:5`→3`
  • 逆转录酶具有以下三种活力:1.RNA指导的DNA聚合酶活力;2.DNA指导的DNA聚合酶活力;3.RNA水解酶活力。1970年,Temin和Baltimore两个实验室同时报道了逆转录酶,使他们于1975年共享诺贝尔生理医学奖。逆转录酶以RNA作为模板合成DNA。逆转录酶可以看着是依赖于RNA的DNA聚合酶。

第31页:逆转录酶合成DNA的过程I.以RNA

逆转录酶合成DNA的过程I.以RNA为模板、dNTP为底物,合成一条互补的DNA(称cDNA),即RNA-DNA链II.水解RNA-DNA杂交分子中的RNAIII.以新合成的DNA链为模板合成另一条互补的DNA链,形成双链DNA分子(前病毒)IV.前病毒整合致电细菌染色体上

第32页:逆转录过程1234

逆转录过程1234

第33页:逆转录病毒的繁殖123456

逆转录病毒的繁殖123456

第34页:的生物合成

  • 四、RNA的生物合成
  • 生物合成途径:复制和转录:在DNA分子上合成出与其核苷酸顺序相对应的RNA的过程
  • RNA聚合酶
  • RNA合成的机理
  • 真核生物RNA的合成

第35页:聚合酶

RNA聚合酶

第36页:大肠杆菌RNA聚合酶各亚基的作用

大肠杆菌RNA聚合酶各亚基的作用

第37页:合成的机理

  • RNA合成的机理
  • 转录时只利用DNA双链中的一条链为模板,这条链称为模板链(或反意义链、非编码链);另一条链称为非模板链(有意义链、编码链)
  • 由于转录只在DNA的一条链进行,所以称为不对称转录
  • 转录过程起始、延长、终止RNADNARNA

第38页:起始RNA聚合酶全酶能专一地与DNA上

起始RNA聚合酶全酶能专一地与DNA上RNA合成的起始位点结合,该点称为启动子。启动子是DNA的一个片段。为方便起见,在DNA上使RNA分子开始合成的第一个核苷酸标记为+1;它前方的序列为上游,标记为(-);它后方的顺序为下游,标记为(+)。第一个顺序:有TATAAT样结构,位于转录起始点上游-10碱基区域,称为Pribnow盒;第二个顺序:有TTGACA样结构,位于转录起始点上游-35碱基区域。请注意:这两个区域的顺序并不重要,而重要的是这两个区域之间的距离。

第39页:起始过程

  • 起始过程:
  • RNA聚合酶全酶最初在σ因子作用下,识别转录的起点,识别启动子。在起始点-35碱基区形成疏松复合体。然后,全酶沿模板滑动,直到-10区,即Pribnow盒,则与模板紧密结合。由于此区是富含A-T碱基对的区域,DNA双链能迅速解链,RNA聚合酶识别模板链,滑动到转录的起始位点并开始转录。
  • RNA的5`-端第一核苷酸多为嘌呤核苷酸,即pppA或pppG。

第40页:延长

  • 延长
  • RNA聚合酶延模板滑动催化RNA链的延伸
  • RNA聚合酶全酶σ亚基脱离
  • 转录区域DNA双螺旋解开,转录后DNA又恢复双螺旋结构

第41页:转录的起始和延长

转录的起始和延长总结

第42页:终止当RNA

终止当RNA聚合酶移动到基因末端的终止信号处,转录停止,并从DNA上解离下来。终止的方法有两种:第一、蛋白质因子ρ参与识别终止信号。ρ因子虽然不是RNA聚合酶的亚基组分,但能与RNA聚合酶结合,使RNA聚合酶识别终止信号,停止转录过程。第二、新生的RNA链形成一种特殊的发夹结构,使转录终止。这种特殊的发夹结构能使RNA聚合酶的构象发生变化,从而使其从DNA链脱离下来。当然,新生成的RNA这种特殊的发夹结构实际上也是由DNA终止信号的特殊碱基序列所决定的。

第43页:转录终止的发夹结

转录终止的发夹结构

第44页:转录全过程演示

转录全过程演示

第45页:复制与转录的比较

复制与转录的比较

第46页:真核生物RNA的合成

  • 真核生物RNA的合成
  • 真核生物有三种RNA聚合酶:RNA聚合酶Ⅰ、II、III,负责不同RNA的合成。
  • mRNA转录后加工

第47页:转录后加

  • mRNA转录后加工
  • 修饰
  • 剪切
  • 拼接等在细胞里,由RNA聚合酶最初合成的RNA链往往需要经过一系列的变化,包括链的断裂和化学改造等,才能转变为成熟的RNA。这一过程称为RNA转录后加工。

第48页:的加工

  • mRNA的加工
  • 5`-端加上帽子结构、3`-端添加Poly A
  • 切除内含子1.内含子:许多真核生物的基因是不连续的。有些DNA序列虽然能被转录成RNA,但在加工过程中又被切除,这些片段,称内含子。2.外显子:能够被转录为RNA,并能翻译出蛋白质的DNA序列。

第49页:切除内含子

切除内含子

第50页:的复制

  • 五、RNA的复制
  • RNA复制酶:以病毒RNA为模板
  • 合成新链的方向:5`→3`

第51页:本章重点

  • 本章重点
  • 与复制有关的各种组分
  • 复制与转录的异同
  • 复制和转录的基本过程
  • RNA聚合酶和DNA聚合酶
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