页数:68页文件大小:7.00 MB来源: 临床免疫学ppt课件
本课件讲解免疫学检测技术,先说明抗原抗体反应的特点与影响因素,随后依次展开直接凝集与间接凝集、液相与凝胶内沉淀反应、酶免疫、荧光免疫、放射免疫、化学发光、胶体金与免疫印迹等标记技术,最后介绍免疫细胞分离、亚群分选及功能测定的常用方法。
免疫学检测技术:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
电解质 生理盐水或缓冲液,Ca2+,Mg2+ 酸碱度 pH6~8,补体pH7.3~7.4 温度 15℃~40℃,37℃最适 冷凝集素4℃最适
检测抗原和抗体的体外实验:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
颗粒性抗原或吸附于载体颗粒上的可溶性抗原(或抗体)与相应抗体(或抗原)结合,在电解质参与下,出现肉眼可见的凝集现象。
颗粒性抗原直接与抗体结合,在电解质的参与下,出现肉眼可见的凝集现象。 常用颗粒性抗原:红细胞、细菌等 玻片法和试管法1
玻片凝集试验YYY+:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
结果判断阳性阴性:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
试管凝集试验:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面,与相应的抗体或抗原结合,在电解质的参与下,出现肉眼可见的凝集现象。2
沉淀试验 絮状沉淀试验 免疫浊度测定 凝胶内沉淀反应 单向扩散试验 双向扩散试验 免疫电泳技术
与相应抗体在特殊缓冲液中能快速形成一定大小的抗原抗体复合物,使反应液体变浑浊,呈现一定的浊度。 当抗体量恒定且过量时,浊度与抗原的量成正比。 利用光学测量仪器对浊度进行测定,从标准曲线查出抗原含量。
可溶性抗原与相应抗体在含有电解质的凝胶中向四周扩散,形成浓度梯度,两者相遇并在比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀物。
原理: 将一定量的抗体混入琼脂凝胶中,使待测抗原在凝胶中自由扩散,与抗体结合形成沉淀环,沉淀环大小与抗原浓度呈正相关。1
(沉淀环直径)2抗原浓度1.抗体混于凝胶中2.抗原加入孔内3.抗原自由扩散标准品抗原浓度测定不同病人抗原浓度测定1.测定沉淀环直径
原理: 将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中,两者各自在凝胶中向四周自由扩散,当抗原与抗体相遇,在比例合适时形成沉淀线。2
。“n”为多个抗原抗体系统。*可以用混合抗原鉴定抗体纯度。抗原抗体纯度鉴定*可以用混合抗体鉴定抗原纯度。
免疫技术 以抗原-抗体反应原理为基础,对样品中相应抗原或抗体进行检测。——高特异性 标记技术 将可被探测的示踪物质(酶、荧光素、放射性核素、胶体金、化学发光物质等)用化学方法与化合物连接。——高敏感性
基本原理: 酶免疫技术是利用酶标记抗体(抗原)与相应抗原(抗体)反应形成抗原-抗体-酶复合物,酶催化相应的底物显色,根据颜色变化和显色深浅进行定性和定量。
微量反应板:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
FITCRB200:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
荧光抗体技术的类型:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
2、间接法FF荧光素标记抗体抗原抗体:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
阳性细胞显色有胞质型、胞核型、膜表面型,显色深浅可作为抗原定性、定位和定量依据。“-”为无或仅见极微弱荧光;“+”为荧光较弱但清楚可见;“2+”为荧光明亮;“3+”为耀眼的强荧光。“2+”以上判定为阳性,对照光应呈“-”或“±”。
(三)放射免疫技术:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
电化学发光免疫分析(ECLIA)是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原),以三丙胺(TPA)为电子供体,在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应。
电化学发光免疫测定示意图:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
免疫金标记技术、免疫胶体金技术)是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体检测的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金原子颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,称为胶体金。
胶体金结合物:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
固相NC膜:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
胶体金免疫层析试剂条结构:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
免疫细胞功能的检测:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
PBMC包括:淋巴细胞、单核细胞 各种血细胞比重不同,利用密度梯度离心进行分离 常用分层液:ficoll-hypaque,percoll
聚蔗糖-泛影葡胺分层液(ficoll)法是一种单次密度梯度离心分离法,主要用于分离外周血中的单个核细胞。原理: Ficoll分层液:密度1.077±
Ficoll分离单个核细胞:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
E花环沉降法:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
2.荧光激活细胞分选仪分离法:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
光学系统:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
形态学检查法:本页以图示为主,源文件未提取到更多文字说明,要点可对照原课件图片及相邻页的文字版。
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