20 第二十章 革兰氏阳性产芽孢杆菌.ppt

第1页：兽医微生物学课件封面

动物医学兽医微生物学

第2页：多媒体教学课件扉页

兽医微生物学(多媒体教学课件)

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第4页：本篇章节目录

• 第十五章 革兰氏阳性球菌
• 第十六章 肠杆菌科
• 第十七章 弧菌科
• 第十八章 巴氏杆菌科及相关属
• 第十九章 革兰氏阴性需氧杆菌
• 第二十章 革兰氏阴性无芽孢微需氧和厌氧菌
• 第二十一章 革兰氏阳性无芽孢杆菌
• 第二十二章 革兰氏阳性产芽孢杆菌
• 第二十三章 分支杆菌及相似属
• 第二十四章 螺旋体
• 第二十五章 霉形体
• 第二十六章 立克次体及衣原体

第5页：第二十二章 革兰氏阳性产芽孢杆菌 章节目

• 第二十二章 革兰氏阳性产芽孢杆菌
• 第一节 芽孢杆菌属
• 第二节 梭菌属

第6页：第一节 芽孢杆菌属

第一节 芽孢杆菌属：炭疽芽孢杆菌炭疽芽孢杆菌又称炭疽杆菌，是引起人类、各种家畜和野生动物炭疽的病原，在兽医学和医学上均占有相当重要的地位。

• 一 形态及染色特性本菌为革兰氏阳性大杆菌，1.0-1.2umX3-5um。无鞭毛，不运动。芽孢椭圆形，位于菌体中央，芽孢囊不大于菌体。可形成荚膜。在动物组织和血液中，此菌单在或呈短链，菌体直，菌端平截，呈竹节状，围绕以丰厚的荚膜。荚膜具有较强的抗腐败能力，当菌体因腐败而消失后，仍有残留荚膜，称为“菌影”。

第7页：培养特性此菌

• 动物体内的炭疽杆菌只有当暴露接触空气中的氧气之后，方能形成芽孢。在培养基中，此菌常形成长链，并于培养18-24h后开始形成芽孢。在普通培养基中不形成荚膜，但若在血液、血清琼脂上或在碳酸氢钠琼脂上，于10％-20％CO2环境中培养则形成荚膜。
• 二 培养特性此菌：为需氧菌，最适温度30-37℃。最适pH为7.2-7.6。营养要求不高，普通培养基中即能生长良好。

第8页：在普通琼脂上形成灰白色不

在普通琼脂上形成灰白色不透明、大而扁平、表面干燥、边缘呈卷发状的粗糙(R)型菌落(图22-1)，无毒或弱毒菌株形成光滑(S)型菌落。在血琼脂上一般不溶血。于普通肉汤中培养后，上部液体清朗透明，液面无菌膜或菌环，管底有白色絮状沉淀，轻摇不消散。在含青霉素0.51U/ml的培养基中，细胞壁肽聚糖合成抑制，形成原生质体串，称为“串珠反应”。若青霉素加至10IU/ml，则完全不能生长或轻微生长。

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第10页：抗原结构已知本菌

• 四 抗原结构已知本菌：有荚膜抗原、菌体抗原、保护性抗原及芽孢抗原4种主要抗原成分。荚膜抗原仅见于有毒菌株，与毒力有关，是一种半抗原，无保护作用，可用于血清学鉴定。菌体抗原有两种，一种是存在于本菌细胞壁及菌体内的半抗原，为多糖成分。与细菌毒力无关，但性质稳定，经腐败、加热抗原性不被破坏。Ascoli反应，加热处理抗原依据在此。保护性抗原是一种胞外蛋白质抗原成分，为炭疽毒素的组成成分之
• 一 具有免疫原性，能使机体产生抗本本菌感染的保护力。

第11页：芽孢抗原

• 芽孢抗原：是芽孢的外膜层含有的抗原决定簇，它与皮质一起组成炭疽芽孢的特异性抗原，具有免疫原性和血清学诊断价值。
• 五 致病性本菌可引致各种家畜、野兽和人类的炭疽，牛、绵羊、鹿等易感性最强，马、驼、猪、山羊等次之，犬、猫、食肉兽等则有相当大的抵抗力，禽类一般不感染。通过消化道传染，但也可经呼吸道及皮肤创伤或通过吸血昆虫传播。食草动物炭疽常表现为急性败血症。猪炭疽多表现为慢性的咽部局限感染，犬、猫和食肉兽则多表现为肠炭疽。

第12页：人类对炭疽杆菌的易感性介

• 人类对炭疽杆菌的易感性介于食草动物与猪之间，经消化道、呼吸道或皮肤创伤感染而发生肠炭疽、肺炭疽或皮肤炭疽。此菌毒力主要与荚膜和毒素有关。荚膜抗吞噬，使易于扩散，引起感染乃至败血症。炭疽杆菌的毒素称为炭疽毒素，包括水肿毒素及致死毒素两种。
• 六 微生物学诊断疑似炭疽的病畜尸体严禁剖检，只能自耳根部采取血液，必要时可切开肋间采取脾脏。皮肤炭疽可采取病灶水肿液或渗出物，肠炭疽可采取粪便。

第13页：血清学检查

• 1. 细菌学检查病料涂片以碱性美蓝、瑞氏染色法或姬姆萨染色法染色镜检，如发现有荚膜竹节状大杆菌，即可作出初步诊断。细菌分离可用普通琼脂或血琼脂平板。
• 2. 血清学检查：有多种血清学方法，多以已知抗体来检查被检的抗原。Ascoli氏沉淀反应是用加热抽提待检炭疽菌多糖抗原与已知抗体进行的沉淀试验。适用于各种病料、皮张、严重腐败污染尸体材料，方法简便，反应清晰，故应用广泛。

第14页：间接血凝试验将炭疽抗血清

间接血凝试验将炭疽抗血清吸附于炭粉或乳胶，制成炭粉诊断血清或乳胶诊断血清。检查被检样品中是否含有炭疽芽孢。协同凝集试验可快速检测炭疽杆菌或病料中的可溶性抗原。串珠荧光抗体检查将串珠试验与荧光抗体法结合起来。琼脂扩散试验、酶标葡萄球菌A蛋白间接染色法、荧光抗体间接染色法等。

第15页：免疫防治炭疽痊愈动物

• 七 免疫防治炭疽痊愈动物可获得坚强的免疫，再次感染者很少。抗炭疽血清也可用于治疗和紧急预防，我国目前应用的菌苗有两种。
• 1. 第Ⅱ号炭疽芽孢苗此菌苗系将培养产生的炭疽芽孢，用30％甘油蒸馏水混悬制成，有效期2年。适用牛、马、驴、骡、骆驼、绵羊、山羊和猪，一般不引起接种反应。注射后14d即可产生坚强免度力，免疫期1年。

第16页：无毒炭疽芽孢苗

• 2. 无毒炭疽芽孢苗：其残余毒力较第Ⅱ号炭疽芽孢苗者强，可杀死小鼠及部分豚鼠，有效期2年。适用于牛、马、驴、骡、绵羊和猪，免疫期1年。但是必须注意，此菌苗对山羊反应强烈，可引起严重局部反应，有的甚至发生死亡，故禁用于山羊。

第17页：第二节 梭菌属

第二节 梭菌属：菌体呈杆状、厌氧呼吸、不还原硫酸盐成硫化物，这3项特性可与其他革兰氏阳性产芽孢杆菌相区别。

• 一 属的特征菌体杆状，两端钝圆或尖锐，常单在，革兰氏染色阳性。可形成卵圆形或圆形的芽孢，常使菌体膨大。由于芽孢的形状和位置不同，芽孢体可表现为不同的形状。当芽孢位于菌体中央而膨大时，则芽孢体形如梭状，并非梭菌属的细菌均为梭形。

第18页：梭菌分布

• 二 梭菌分布：梭菌在自然界分布广泛，常见于土壤、污水、腐烂的动植物，人和其他脊椎动物的肠道、人与动物的伤口及软组织感染灶。
• 三 病原梭菌及梭菌病的诊断原则本属有80多种，多为非病原菌，常见的致病菌约11种，多为人兽共患病病原(表22-4)。病原梭菌通常均能产生外毒素，其毒力强。由梭菌引起动勿的疾病，按性质和症状可大致分为5类。

第19页：气肿疽与恶性水肿两病皆

• 1. 气肿疽与恶性水肿两病皆为急性败血性传染病，而且均有气性水肿的症状特征，在临床上极为相似，应注意鉴别。气肿疽病原为气肿疽梭菌，主要通过消化道感染。恶性水肿由刨伤感染引起，其病原复杂多样，在动物主要是腐败梭菌、在人主要是A型产气荚膜梭菌，此外还可能是A型诺维梭菌或其他，也可是两种以上梭菌的混合感染。两病的微生物学诊断主要衣靠病原菌检查。

第20页：快疫与类

• 2. 快疫与类：快疫是一类病程极短的急性致死性传染病，包括羊快疫、羊猝狙(ju)、肠毒血症、黑疫及细菌性血红素尿，在临床上有许多相似之处，本质均为毒血症。羊猝狙和肠毒血症的病原为产气荚膜梭菌，系在肠道内产生毒素，细菌不一定侵人体内，故微生物学诊断主要依靠肠内容物的毒素检查。羊快疫系腐败梭菌经消化道感染所致，病菌虽最初在肠道内产生毒素，但其后则侵人体内造成败血症，故微生物学诊断为依靠病原菌检查。

第21页：黑疫的病原

• 黑疫的病原：为B型诺维梭菌，细菌性血红素尿的病原为溶血梭菌，二者均主要存在于肝脏，因肝组织损害，细菌乘机繁殖，产生毒素而引起发生。微生物学诊断主要依靠病原菌检查，但也可检查毒素。
• 3. 痢疾与肠炎：是由产气荚膜梭菌在肠道内产生毒素引起，包括羔羊痢疾、犊牛痢疾和人、禽坏死性肠炎，细菌不一定侵入体内，微生物学诊断亦主要依靠肠内容物的毒素检查。

第22页：食物中毒

• 4. 食物中毒：包括人畜肉毒中毒症与人产气荚膜梭菌食物中毒，都是由于病原菌在食物或饲料中生长繁殖，产生毒素被食人而致病。肉毒中毒症的微生物学诊断主要检测肉毒毒素，其次是细菌检查。产气荚膜梭菌食物中毒则须依靠由可疑食物分离细菌，并测定其毒素产生能力。
• 5. 破伤风系：破伤风梭菌经创伤感染，在感染部位发育繁殖，产生毒素而引起疾病（毒血症）。此病症状极其特征，通常不需微生物学诊断。

第23页：分离鉴定梭菌大多专性厌氧

• 四 分离鉴定梭菌大多专性厌氧，培养须采用厌氧培养法。诺维梭菌、溶血梭菌等厌氧要求十分苛刻，所用培养基必须新鲜制备或保存于厌氧环境之中。若在空气环境中放置超过数小时，其中某些物质转化为氧化型，虽再作厌氧培养，细菌亦不生长。这些细菌对氧极为敏感，仅在空气中暴露20-30min即遭抑制而不再生长。因此划线接种后应立即厌氧培养，培养物应迅速移植，不能久置于空气之中。

第24页：污染材料分得纯培养

污染材料分得纯培养，可根据梭菌芽孢耐热性较强的特点，先经80 ℃加热20min以杀死不耐热的细菌，然后再作分离培养。腐败梭菌、产气荚膜梭菌易于死后侵入，诺维梭菌、溶血梭菌等存在于正常动物体中，由动物体内分出梭菌，并不能肯定是病原，应结合流行病学、病变及微生物学检查。此时，细菌毒力测定极为重要。

第25页：产气荚膜梭菌本菌旧名魏氏

• 五 产气荚膜梭菌本菌旧名魏氏梭菌或产气荚膜杆菌。在自然界分节极广，可见于土壤、污水、饲料、食物、粪便以及人畜肠道等中，在一定条件下，也可引起多种严重疾病。
• 1. 形态及染色特征菌体直杆状，两端钝圆，0.6-2.4umXl.3-19.0um，单在，革兰氏阳性。芽孢大圆，位于菌体中央或近端，使菌体膨胀，但在一般条件下罕见形成芽孢。多数菌株可形成荚膜。
• 2. 致病性本菌：致病作用主要在于它所产生的毒素。

第26页：A型菌

A型菌主要是引起人气性坏疽和食物中毒，也引起动物气性坏疽，还可引起牛、羔羊、新生羊驼、野山羊、驯鹿、仔猪等肠毒血症；B型菌主要引起羔羊痢疾，还可引起驹、犊牛、羔羊、绵羊和山羊的肠毒血症或坏死性肠炎；C型菌主要是绵羊猝狙的病原，也能引起羔羊、犊牛、仔猪、绵羊的肠毒血症和坏死性肠炎以及人的坏死性肠炎；D型菌引起羔羊、绵羊、山羊、牛的肠毒血症；E型菌可致犊牛、羔羊肠毒血症。

第27页：微生物学诊断本菌A型所致

• 3. 微生物学诊断本菌A型所致气性坏疽及人食物中毒的微生物学诊断，主要依靠细菌分离鉴定。其余各型所致的各种疾病，均系细菌在肠道内产生毒素所致，因止从病料中检出该菌，并不能说明它就是病原。所以细菌学检查只有当分离到毒力强大的此菌才具有一定的参考意义。鉴定本菌要点：厌氧生长、菌落整齐、生长快、革兰氏阳性粗干菌、不运动，有双层溶血环，引起牛奶暴烈发酵，胸肌注射鸽越夜死亡，胸肌涂片可见有荚膜的菌体。

第28页：有效微生物学诊断方法

• 有效微生物学诊断方法：是肠内容物毒素检查。其方法为取回肠内容物，加适量生理盐水，离心取上清液分两分，一份不加热，一份加热(60C30min)，分别静脉注射家兔(1-3m1)或小鼠(0.1-0.3m1)。如有毒素存在，不加热组动物常于数分钟至十数小时内死亡，而加热组动物不死亡。
• 4. 免疫防治预防羔羊痢疾、猝狙、肠毒血症以及仔猪肠毒血症等，可用三联菌苗或五联菌苗。

第29页：肉毒梭菌本菌广泛分布于土

• 六 肉毒梭菌本菌广泛分布于土壤，动物肠道，饲料以及食品中。不能在活的机体内生长繁殖。当有适宜营养和厌氧环境时，即可生长繁殖并产生肉毒毒素。人畜食人含此毒素的食品、饲料或其他物品，即可中毒而发生肉毒中毒症。
• 1. 形态及染色特性本菌多呈直杆状，单在或成双，革兰氏阳性。着生周鞭毛，能运动。芽孢卵圆，位于菌体近端，大于菌体直径，使细胞膨大，易于在液体和固体培养基上形成芽孢。

第30页：培养特性本菌专性厌氧

• 2. 培养特性本菌专性厌氧：最适温度30-37℃。产毒素的最适温度为25-30℃。营养要求不高，在普通培养基中均能生长。在血平板上，可形成直径1-6mm，圆形到扇状、裂叶状或根状边缘的不规则菌落，常带有斑状或花叶状的中心结构，β溶血。
• 3. 抵抗力本菌繁殖体：抵抗力中等，加热80C30min或100C10min能将其杀死，但芽孢抵抗力极强。

第31页：抗原性及分型

• 芽孢在湿热100℃5-7h、高压105℃100min或120℃ 5-20min、干热180℃15min可被杀死。肉毒毒素的抵抗力：耐酸，但对碱敏感，pH8.5以上破坏。0.1％高锰酸钾、加热80℃30min或100 ℃ 10min，均能破坏毒素。
• 4. 抗原性及分型：根据毒素抗原性的差异，可将该菌分为A、B、C、D、E、F、G7个型，用各型毒素(或类毒素)免疫动物，只能获得中和相应型毒素的特异性抗毒素。各型菌虽产生其型特异性毒素，但型间尚存在交叉现象。

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第33页：致病性所

• 6. 致病性所：有温血动物和冷血动物对肉毒毒素均有感受性，在家畜中马、牛、羊、水貂、禽类、猪，小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猫、犬、猴等实验动物以及鸡、鸽等各种禽类都敏感。
• 7. 微生物学诊断从可疑媒介物或患病人畜胃肠内容物及血清中检查肉毒毒素，是主要的微生物学诊断手段。

第34页：肉毒毒素检测A.材料处理

肉毒毒素检测A.材料处理被检材料，稀释、研磨成乳状，室温浸泡数小时、离心。取上清液分为两份，一份按1/10量加入10％胰酶液混匀，于37℃作用60min，然后进行检测。另1份不处理。B.检出试验取两种处理液，分别腹腔注射小鼠2只（0.5mL/只），观察4d。若有毒素存在，小鼠多在注射后24h内发病、死亡。主要表现为竖毛、四肢瘫软、呼吸困难，呼吸呈风箱式，腰部凹陷，宛若蜂腰，最终死于呼吸麻痹。则判定可能有肉毒毒素存在。

第35页：C.证实试验分3组进行

C.证实试验分3组进行。各取lmL被检液，第1组(毒素中和组)，加等量多型混合肉毒抗毒素，混匀后置37℃作用30min；第2组(毒素灭活对照组)，加等量缓冲液，混匀后煮沸10min；第3组(毒素对照组)，加等量缓冲液混匀即可。3组混合液分别腹腔注射小鼠各2只（0.5mL/只），观察4d。若1和2组的小鼠均获保护存活，而第3组小鼠以特有症状死亡，则可确定有肉毒毒素的存在。

第36页：免疫防治

• D定型试验可先进行毒力测定，取含10-100MLD/ml的毒素液，分别与各型肉毒抗毒素及明胶磷酸盐缓冲液等量混合，37℃作用30min后依上法进行试验，能保护小鼠免于死亡的抗毒素组，即为所含肉毒毒素的型别。
• 8. 免疫防治：在常发地区，可用明矾沉淀类毒素预防注射，有效免0.5-1年。人畜一旦出现肉毒中毒症，可立即用多价抗毒素（或同型抗毒素）血清进行治疗。

第37页：破伤风梭菌本菌

• 七 破伤风梭菌本菌：又名破伤风杆菌，是引起人畜破伤风的病原。本病以骨骼肌产生强直性痉挛的症状为特征，故又称为强直症，此菌也称为强直梭菌。
• 1. 生物学特性本菌：为两端钝圆、细长、正直杆菌，多单在。在动物体内外均能形成圆形芽孢，位于菌体一端，横径显著大于菌体，而使芽孢体呈鼓槌状(图22-6)。革兰氏阳性。此菌严格厌氧，接触氧后很快死亡。繁殖体抵抗力不强，但其芽孢的抵抗力极强。

第38页：致病性当芽孢随土壤

• 2. 致病性当芽孢随土壤、污物通过适宜的皮肤黏膜创伤(自然外伤、分娩损伤或断脐、去势、断尾、剪毛及其他外科手术等的人工伤口)侵入机体时，即可在其中发育繁殖，产生强烈毒素，毒素吸收引发破伤风。造成此病发生的创伤必须具有厌氧环境；当创伤内发生组织坏死时，坏死组织能吸收游离氧而形成良好的厌氧环境，其他需氧菌的混合感染，也有利于厌氧形成。

第39页：易感动物

易感动物在自然情况下，本菌可感染很多动物。除人易感外，马属动物的易感性最高，其次是牛、羊、猪，犬、猫等，禽类和冷血动物不敏感。实验动物家兔、小鼠、大鼠、豚鼠对破伤风痉挛毒素易感。毒素产生两种毒素。一种为破伤风痉挛毒素，毒力非常强，为蛋白外毒素，可引起神经兴奋性的异常增高和骨骼肌痉挛。另一种为破伤风溶血素，不耐热，对氧敏感，与致病性无关。破伤风梭菌毒素具有良好抗原性，用它制成类毒素。

第40页：免疫防治主动

• 3. 微生物学诊断破伤风临床症状特征，一般不需微生物学诊断。
• 4. 免疫防治主动：免疫预防可用明矾沉淀破伤风类毒素，注射后1个月产生免疫了，免疫期1年。若第2年再注射1次，则免疫力可持续4年。破伤风抗毒素血清可用于紧急预防(发生严重创伤或大手术之前)及破伤风治疗，效果不错。此被动免疫力产生迅速，但仅能维持14～21d。

第41页：结束页与致谢

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