第1页：兽医微生物学课件封面
动物医学兽医微生物学
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兽医微生物学(多媒体教学课件)
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第4页：本篇章节目录
- 第八章 抗原与抗体
- 第九章 免疫系统与免疫应答
- 第十章 抗感染免疫
- 第十一章 变态反应
- 第十二章 免疫调节与免疫遗传
- 第十三章 免疫血清学技术
- 第十四章 免疫学的应用
第5页：第十二章 免疫调节与免疫遗传 章节目录
- 第十二章 免疫调节与免疫遗传
- 第十三章 免疫血清学技术
- 第一节 概念
- 第二节 凝聚性反应
- 第三节 标记抗体技术
- 第四节 补体参与的试验
- 第五节 中和试验
第6页：抗原与相应抗体
- 抗原与相应抗体：在体内和体外均能发生特异性结合，因抗体主要来自血清，因此在体外进行的抗原抗体反应称为血清学反应或免疫血清学技术。
第一节
- 1. 凝聚性反应：包括凝集试验和沉淀试验。
- 2. 标记抗体技术：包括荧光抗体、酶标抗体、放射性标记抗体、发光标记抗体技术等。
- 3. 补体参与的反应：补体结合试验、免疫黏附试验等。
第7页：中和反应病毒中和试验
- 4. 中和反应病毒中和试验、毒素中和试验。
- 一 血清学反应的一般特点
- 1. 特异性与交叉性血清学反应具有高度特异性，如抗猪瘟病毒的抗体只能与猪瘟病毒结合，而不能与口蹄疫病毒结合。这是血清学试验用于分析各种抗原和进行疾病诊断的基础。但若两种天然抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交叉反应。交叉反应是区分血清型和亚型的重要依据。
第8页：抗原抗体结合机理
- 2. 抗原抗体结合机理：抗原和抗体的结合为弱能非共价键结合，其结合力决定于抗原决定簇和抗体的抗原结合点之间形成的非共价键的数量、性质和距离。常规的血清学反应，如凝集反应、沉淀反应、补体结合反应等，只有在抗原与抗体呈适当比例时，结合反应才出现凝集，沉淀等可见反应，在最适比例时，反应最明显。这种因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反应的现象，称为带现象（图13-1-166）。
第9页：血清学反应的影响因素
- 二 血清学反应的影响因素
- 1. 电解质特异性的抗原和抗体具有对应的极性基(羧基、氨基等)，它们互相吸附后，其电荷和极性被中和因而失去亲水性，变为憎水系统。易受电解质作用失去电荷而互相凝聚、发生凝集或沉淀反应。
- 2. 温度较高：的温度可以增加抗原和抗体接触的机会，从而加速反应的出现。常用37℃水浴保温。
- 3. 酸碱度血清学反应常用pH为6-8，过高或过低的pH可使抗原抗体复合物重新离解。
第10页：第二节 凝聚性反应
第二节
- 一 凝集试验细菌、红细胞等颗粒性抗原，与相应抗体结合，在有适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验。参与的抗体主要为IgG、IgM。凝集试验可用于检测抗原或抗体，优点是操作简便。
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第12页：试管法
- （2） 试管法：为一种定量试验，用以检测血清抗体含量。将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后加入等量抗原，置37℃水浴数小时观察。视不同凝集程度记录为++++(100％凝集)、+++(75％凝集)、++(50％凝集)、+(25％凝集)和-(不凝集)。以其++以上的血清最大稀释度为该血清的凝集价(或称滴度)。试验时必须设置阳性血清、阴性血清和生理盐水等对照。
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第14页：乳胶凝集试验(LAT)用
- 3. 乳胶凝集试验(LAT)用它胶乳微球（直径约0.8um）作载体吸附某些抗原(或抗体)，可用以检测相应的抗体(或抗原)。优点快速简便、易保存、较准确等。
- 4. 协同凝集试验(COAG)葡萄球菌A蛋白(SPA)能与多种动物IgG分子的Fc片结合，结合后保持其抗体活性，当与相应的抗原结合时，就可产生凝集反应。本法广泛应用于多种细菌和某些病毒的快速诊断。
第15页：环状沉淀试验
- 二 沉淀试验可溶性抗原与相应抗体结合，在电解质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验。参与沉淀试验的抗原称沉淀原，抗体称为沉淀素。抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等，抗原分子较小，如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出液等。
- 1. 环状沉淀试验：在小口径试管内先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待检抗原于血清表面，使之成为分界清晰的两层。数分钟后，两层液面交界处出现白色环状沉淀，即为阳性反应。
第16页：用途用于抗原的定性试验
用途用于抗原的定性试验，如诊断炭疽的Ascoli试验、链球菌血清型鉴定、沉淀素的效价滴定等。试验时出现白色沉淀带的最高血清稀释倍数，即为血清的沉淀价。
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第18页：抗原抗体
抗原抗体在琼脂凝胶内相向扩散，在两孔之间比例最合适的位置上出现沉淀带。双向扩散主要用于抗原和抗体的测定。用8% Nacl溶液制1%琼脂糖平板，打孔（7孔梅花形、孔径6 mm周边与中心孔距3 mm）。
第19页：双扩散用于疾病诊断
- 1. 双扩散用于疾病诊断：以IBD诊断为例，中心孔加IBD标准阳性血清，周围孔分别加IBD标准抗原、生理盐水、待检抗原1.2.3.4。
- 2. 双扩散用于抗体检测：以免疫鸡IBD抗体检测为例，中心孔加IBD标准抗原，周围孔分别加IBD标准阳性血清.、IBD阴性血清、待检血清1.2.3.4。
第20页：对流免疫电泳原理抗原
- 3. 对流免疫电泳原理抗原在碱性溶液(>pH8．2)中带负电荷，在电场中向正极移动，而抗体球蛋白带电荷弱，在琼脂电泳时，由于电渗作用，向相反的负极泳动。将抗体置正极端，抗原置负极端，电泳时抗原抗体相向泳动，在两孔之间形成沉淀带。琼脂凝胶制备选用优质琼脂（或琼脂糖），浓度为1％-2％，pH通常用pH8.2-8.6的巴比妥缓冲液，离子强度为0.025-0.075mol／L，并加0.01％硫柳汞作防腐剂。
第21页：极-+极AbAgAb
极-+极AbAgAbAbAgAg试验操作制备琼脂凝胶玻板、打孔，挑去孔内琼脂后，将抗原置负极一侧孔内，抗血清置正极侧孔。加样后电泳30-90min观察结果。
第22页：试验操作制备琼脂凝胶玻板
试验操作制备琼脂凝胶玻板、打孔，挑去孔内琼脂后，将抗原置负极一侧孔内，抗血清置正极侧孔。加样后电泳30-90min观察结果。本法优点a.敏感较双扩散敏感10-16倍；b.快速仅需1h左右，大大缩短了沉淀带出现的时间。c.用途适用快速诊断检测。如乙型肝炎抗原的快速检测，猪传染性水泡病和口蹄疫等的快速确诊，IBD、MD的快速检测等。
第23页：第三节 标记抗体技术
第三节 标记抗体技术：抗体、抗原分子小，在含量低时形成的抗原抗体复合物是不可见的。有一些物质即使在超微量时也能通过特殊的方法将其检查出来，如果将这些物质标记在抗体分子上，可以通过检测标记分子来显示抗原抗体复合物的存在，此种根据抗原抗体结合的特异性和标记分子的敏感性建立的技术，称为标记抗体技术。．高敏感性的标记分子主要有荧光素、酶分子、放射性同位素三种，由此建立荧光抗体技术、酶标抗体技术和同位素标记抗体技术。
第24页：补体结合试验
- 其特异性和敏感性远远超过常规血清学方法，被广泛应用于病原微生物鉴定、传染病的诊断、分子生物学中的基因表达产物分析等。
第四节 补体结合试验：补体结合试验是应用可溶性抗原，与相抗体结合后，其抗原抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能察觉，如再加入致敏红细胞(溶血系)，可根据是否出现溶血反应判定反应系统中是否存在相应的抗原和抗体。参与补体结合反应的抗体称为补体结抗体。补体结合抗体主要为IgG和IgM。通常是利用已知抗原检测未知抗体。
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第26页：根据其产生的保护效果的差
根据其产生的保护效果的差异，可判断该病毒是否已被中和，并根据一定方法计算中和的程度(中和指数)，即代表中和抗体的效价。种类根据测定中方法的不同，中和试验主要有两种。一是测定能使动物或细胞死亡数目减少至50％(半数保护率，PD50)血清稀释度，即终点法中和试验。二是测定使病毒在细胞上形成的空斑数目减少至50％时血清稀释度，即空斑减少法中和试验。毒素和抗毒素亦可进行中和试验，其方法与病毒中和试验基本相同。
第27页：结束页与致谢
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