公开课网食品科学基础学科食品微生物学 10 第七章 微生物的营养和培养基.ppt

10 第七章 微生物的营养和培养基.ppt

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本课件先给出微生物细胞的主要元素与化学组成数据,随后逐项讲解碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六大营养要素及其碳源谱与氮源谱;接着按能源与碳源划分光能自养、光能异养、化能自养、化能异养四种营养类型;最后讲解培养基配制四原则、三类分类与四种吸收运输方式。

第四章微生物营养导览页,列出细胞化学组成、营养要素、营养类型、吸收方式与培养基五节
微生物细胞化学组成说明,指出碳氢氧氮磷硫六种元素占细菌细胞干重的百分之九十七
微生物灰分元素含量对比表,列出固氮菌、酵母菌与霉菌在九种氧化物上的百分比
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第1页:第四章 微生物营养导览

  • 第一节 微生物细胞的化学组成
  • 第二节 微生物的营养要素
  • 第三节 微生物的营养类型
  • 第四节 微生物对营养物质的吸收方式
  • 第五节 培养基

第2页:微生物细胞的化学组成

与其他高等动植物细胞一样,微生物细胞由大量元素碳、氢、氧、氮、磷、硫(这六种元素占细菌细胞干重的 97%)和微量元素铁、锰、锌等构成。

这些元素主要以如下形式存在:

  • 有机物质:蛋白质、糖、脂、核酸、维生素及它们的降解产物、代谢产物等
  • 无机物质:水和无机盐等

水是细胞中的一种主要成分。

原文表述为「水一般可占细胞干重的 90%以上」,按常识应为占细胞鲜重的绝大部分,此处统一按鲜重口径表述,具体数值以教材表格为准。

第3页:微生物细胞灰分元素含量表

微生物细胞物质中灰分元素含量的百分比
灰分元素固氮菌酵母菌霉菌
P₂O₅4.953.544.85
SO₃0.290.0390.11
K₂O2.412.342.81
Na₂O0.07—1.12
MgO0.820.4280.38
CaO0.890.3830.19
Fe₂O₃0.080.0350.16
SiO₂—0.0930.04
CuO———

第4页:微生物细胞主要元素含量表

表4-1 微生物细胞中几种主要元素的含量(干重的百分数)
元素细菌酵母菌霉菌
碳5049.847.9
氮1512.45.2
氢86.76.7
氧2031.140.2
磷3——
硫1——

第5页:微生物细胞的化学组成表

表4-2 微生物细胞的化学组成
主要成分细菌酵母菌霉菌
水分(占细胞鲜重的%)75~8570~8085~90
蛋白质(占细胞干重的%)50~8032~7514~15
碳水化合物(占细胞干重的%)12~2827~637~40
脂肪(占细胞干重的%)5~202~154~40
核酸(占细胞干重的%)10~206~81
无机盐(占细胞干重的%)2~303.8~76~12

第6页:营养与营养物的概念

营养物(nutrient)
那些能够满足机体生长、繁殖和完成各种生理活动所需要的物质。
营养(营养作用,nutrition)
微生物获得与利用营养物质的过程。

第7页:微生物与动植物营养要素比较表

表4-3 微生物和动物、植物营养要素的比较
营养要素动物(异养)微生物(异养)微生物(自养)绿色植物(自养)
碳源糖类、脂肪糖、醇、有机酸等二氧化碳、碳酸盐等二氧化碳、碳酸盐
氮源蛋白质或其降解物蛋白质或其降解物有机或无机氮化物、氮无机氮化物、氮
能源与碳同与碳同氧化无机物或利用日光能利用日光能
生长因子维生素一部分需要维生素等不需要不需要
无机元素无机盐无机盐无机盐无机盐
水分水水水水

原文氮源一栏存在文字重复粘连,已按动物(异养)、微生物(异养)、微生物(自养)、绿色植物(自养)四列整理。

第8页:碳源的概念与碳源谱

碳源(carbon source)
凡是提供微生物营养所需的碳元素(碳架)的营养源,功能是构成细胞物质,并为异养微生物提供整个生理活动所需的能量。

微生物的碳源谱:

  • 无机含碳化合物:如 CO₂ 和碳酸盐等
  • 有机含碳化合物:糖与糖的衍生物、脂类、醇类、有机酸、烃类、芳香族化合物以及各种含氮的化合物

微生物不同,利用上述含碳化合物的能力不同:如假单胞菌属中的某些种可以利用90 种以上不同类型的碳源物质;某些甲基营养型细菌只能利用甲醇或甲烷等一碳化合物生长。

第9页:微生物的碳源谱表

表4-4 微生物的碳源谱
类型元素水平化合物水平培养基原料水平
有机碳C·H·O·N·X复杂蛋白质、核酸等牛肉膏、蛋白胨、花生饼粉等
有机碳C·H·O·N多数氨基酸、简单蛋白质等一般氨基酸、明胶等
有机碳C·H·O糖、有机酸、醇、脂类等葡萄糖、蔗糖、各种淀粉、糖蜜等
有机碳C·H烃类天然气、石油及其不同馏份、石蜡油等
无机碳C(?)——
无机碳C·OCO₂CO₂
无机碳C·O·XNaHCO₃NaHCO₃、CaCO₃、白垩等

第10页:氮源的概念与氮源谱

氮源(nitrogen source)
凡是提供微生物营养所需的氮元素的营养源,主要作用是合成细胞物质中的含氮物质。
  • 少数自养细菌能利用铵盐、硝酸盐作为机体生长的氮源与能源
  • 某些厌氧细菌在厌氧与糖类物质缺乏的条件下,也可以利用氨基酸作为能源物质

第11页:微生物的氮源谱表

表4-5 微生物的氮源谱
类型元素水平化合物水平培养基原料水平
有机氮N·C·H·O·X复杂蛋白质、核酸等牛肉膏、酵母膏、饼粕粉、蚕蛹粉等
有机氮N·C·H·O尿素、一般氨基酸、简单蛋白质等尿素、蛋白胨、明胶等
无机氮N·HNH₃、铵盐等(NH₄)₂SO₄ 等
无机氮N·O硝酸盐等KNO₃ 等
无机氮NN₂空气

第12页:常用氮源与速效迟效氮源

常用无机氮源与有机氮源:

  • 实验室常用:碳酸铵、硝酸盐、硫酸铵、尿素、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等
  • 生产上常用:硝酸盐、铵盐、尿素、氨以及蛋白含量较高的鱼粉、蚕蛹粉、黄豆饼粉、花生饼粉、玉米浆等
迟效氮源
蛋白氮必须通过水解降解成胨、肽、氨基酸等才能被机体利用;迟效氮源有利于代谢产物的形成。
速效氮源
无机氮源或以蛋白质降解产物形式存在的有机氮源可直接被菌体吸收利用;速效氮源通常有利于机体的生长。
氨基酸异养型微生物(营养缺陷型)
没有将无机氮合成有机氮的能力,不能把尿素、铵盐等无机氮源自行合成生长所需的氨基酸,需从外界吸收现成氨基酸才能生长。

第13页:能源的概念与能源谱

能源
能为微生物的生命活动提供最初能量来源的营养物或辐射能。

微生物的能源谱:

  • 有机物:化能异养微生物的能源(同碳源)
  • 无机物:化能自养微生物的能源(不同于碳源)
  • 辐射能:光能自养和光能异养微生物的能源

第14页:化能自养菌的能源物质

化能自养微生物的能源物质是一些还原态的无机物质:

  • NH₄⁺、NO₂⁻、S、H₂S、H₂、Fe²⁺ 等
  • 能利用这些物质作为能源的全部是细菌,如硝酸细菌、亚硝酸菌、硫化细菌、硫细菌、铁细菌、氢细菌等
  • 这些无机养料常常是双功能的,如 NH₄⁺ 既是硝酸细菌的能源,又是它的氮源
  • 有机营养物常有双功能或三功能作用,既是异养微生物的能源,又是碳源或氮源
  • 辐射能是单功能的,只为光能微生物提供能源

第15页:生长因子的概念与种类

生长因子(growth factor)
一类对微生物正常代谢必不可少且不能用简单的碳源或氮源自行合成的有机物,主要包括维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶(碱基)及其衍生物,此外还有甾醇、胺类、脂肪酸等。

缺乏合成生长因子能力的微生物称为「营养缺陷型」微生物;各种维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶的生理功能见教材。

第16页:无机盐的种类与需要量

  • 大量元素:P、S、K、Mg、Ca、Na、Fe 等,所需浓度在 10⁻³~10⁻⁴ mol/L
  • 微量元素:Cu、Zn、Mn、Mo、Co 等,所需浓度在 10⁻⁶~10⁻⁸ mol/L
  • 一般微生物生长所需要的无机盐有硫酸盐、磷酸盐、氯化物以及含钠、钾、镁、铁等化合物

第17页:无机盐的生理功能

大量元素:

  • 一般功能:细胞内一般分子成分(P、S、Ca、Mg、Fe 等)、渗透压的维持(Na⁺ 等)、生理调节物质与酶的激活剂、pH 的稳定

大量元素(续):

  • 特殊功能:化能自养菌的能源(S、Fe²⁺、NH₄⁺、NO₂⁻ 等)、无氧呼吸时的氢受体(NO₃⁻、SO₄²⁻ 等)

微量元素:

  • 酶的激活剂(Cu²⁺、Mn²⁺、Zn²⁺ 等)、特殊分子结构成分(Co、Mo 等)

第18页:水分的生理功能

水分是生物细胞的主要化学成分,其生理功能表现为:

  • 细胞的构成成分
  • 一系列生理生化反应的反应介质
  • 参与许多生理生化反应
  • 有效地控制细胞内的温度变化

第19页:营养类型的划分依据

异养型生物
生长时需要以复杂的有机物质作为营养物质。
自养型生物
生长时能以简单的无机物质作为营养物质。
化能营养型生物
依靠化合物氧化释放的能量进行生长。
光能营养型生物
依靠光能进行生长。

动物属于异养型生物;微生物既有异养型也有自养型,大多数微生物属于异养型,少数属于自养型;动物和大部分微生物属于化能营养型,植物和少部分微生物属于光能营养型。

第20页:(图片页,文字待补充)

本页源文件未提取到文字内容,仅有图片。建议对照原课件图片补充本页要点说明。

第21页:光能自养型微生物

以 CO₂ 作为唯一碳源或主要碳源,并利用光能,以无机物如硫化氢、硫代硫酸钠或其他无机硫化物作为供氢体将 CO₂ 还原成细胞物质,同时产生元素硫:

光能 + CO₂ + H₂S —(光合色素)→ [CH₂O] + 2S + H₂O

包括蓝细菌(含叶绿素)、红硫细菌和绿硫细菌等少数微生物(含细菌叶绿素),由于含有光合色素,能使光能转变成化学能(ATP)供机体直接利用。

第22页:光能异养型微生物

以 CO₂ 为主要碳源或唯一碳源,以有机物(如异丙醇)作为供氢体,利用光能将 CO₂ 还原成细胞物质;红螺菌属中的一些细菌属于此种营养类型。

光能 + 2(CH₃)₂CHOH + CO₂ —(光合色素)→ 2CH₃COCH₃ + [CH₂O] + H₂O

光能异养型细菌在生长时大多数需要外源的生长因子。

第23页:化能自养型微生物

以 CO₂ 或碳酸盐作为唯一或主要碳源,以无机物氧化释放的化学能为能源,利用电子供体如氢气、硫化氢、二价铁离子或亚硝酸盐等使 CO₂ 还原成细胞物质。

这类微生物主要有:

  • 硫化细菌
  • 硝化细菌
  • 氢细菌
  • 铁细菌

它们在自然界物质转换过程中起着重要的作用。

第24页:化能异养型微生物

多数微生物属于化能异养型,生长所需能量和碳源通常来自同一种有机物。

腐生型微生物
利用无生命活性的有机物作为生长的碳源。
寄生型微生物
寄生在生活的细胞内,从寄生体内获得生长所需要的营养物质。
兼性腐生型或兼性寄生型
存在于寄生与腐生之间的中间过渡类型微生物。

第25页:培养基的概念

培养基
人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质,是进行科学研究、发酵生产微生物制品等的基础。

第26页:配制培养基的原则:营养需要

  • 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基:自养型微生物的培养基完全可以(或应该)由简单的无机物质组成,异养微生物的培养基至少需要含有一种有机物质
  • 按微生物的主要类群分为细菌、放线菌、酵母菌和霉菌,所需培养基成分也不同
  • 分别称为牛肉膏蛋白胨培养基、高氏1号合成培养基、麦芽汁培养基、查氏合成培养基

第27页:配制培养基的原则:浓度与配比

注意要点:

  • 营养物的浓度:浓度合适才对微生物表现出良好作用,浓度过大起抑制作用,浓度过小不能满足生长需要
  • 各营养物质之间的浓度比直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成与积累,尤其是碳氮比(C/N)的影响更为明显

例如微生物的谷氨酸发酵中:

  • C/N 为 4∶1 时,菌体大量繁殖,谷氨酸积累少
  • C/N 为 3∶1 时,菌体繁殖受到抑制,而谷氨酸大量增加

第28页:配制培养基的原则:pH控制

各类微生物生长的最适 pH 各不相同:

  • 细菌与放线菌生长的 pH 在 7—7.5 之间
  • 酵母菌与霉菌生长的 pH 在 4—5 之间

维持 pH 相对恒定的两种方式:

  • 内源调节:在培养基里加一些缓冲剂或不溶性的碳酸盐,调节培养基的碳氮比
  • 外源调节:按实际需要流加酸或碱液

第29页:配制培养基的原则:经济节约

配制培养基时应尽量考虑利用价廉并且易于获得的原料作为培养基的成分,特别是在工业发酵中培养基用量很大,更应考虑到这一点,以便降低产品成本。

第30页:培养基的种类划分

  • 按培养基的组成成分分类
  • 按培养基的物理状态分类
  • 按培养基的功能分类

第31页:合成培养基与天然培养基

合成培养基
由化学成分完全了解的物质配制而成,组成成分精确、重复性强,但微生物生长较慢且价格昂贵,适于实验室范围内营养需要、代谢、分类鉴定、生物测定以及菌种选育、遗传分析等研究工作。
天然培养基
利用化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物质(如肉浸液、酵母浸汁、土壤浸液、豆芽汁、玉米粉、麸皮、牛奶、血清等)制成,比较经济,除实验室经常使用外,更适宜于生产上大规模培养微生物和生产微生物产品。

第32页:按物理状态划分的培养基

固体培养基
在液体培养基中加入 1.5%~2.0% 的凝固剂制成,常用于微生物的分离、纯化、计数等研究。
半固体培养基
在液体培养基中加入 0.2%~0.7% 的琼脂构成,常用来观察细菌运动的特征,进行菌种鉴定和噬菌体效价滴定等实验工作。
液体培养基
不含任何凝固剂,常用于大规模的工业生产以及实验室进行微生物生理代谢等基本理论的研究工作。

科研与生产中常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅胶三种;除在液体培养基中加入凝固剂之外,一些由天然的固体基质制成的培养基也属于固体培养基。

第33页:(图片页,文字待补充)

本页源文件未提取到文字内容,仅有图片。建议对照原课件图片补充本页要点说明。

第34页:加富培养基、选择培养基与鉴别培养基

加富培养基
在普通培养基里加过血、血清、动物(或植物)组织液或其他营养物质(或生长因子)的一类营养丰富的培养基,用以培养营养要求苛刻的异养微生物。
选择培养基
根据某种或某一类群微生物的特殊营养需要或对某种化合物的敏感性不同而设计,可将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。
鉴别培养基
在普通培养基中加入能与某种代谢产物发生反应的指示剂或化学药品,从而产生明显的特征性变化,以区别不同的微生物。

第35页:营养物质吸收方式导览

微生物吸收营养物质的方式主要有:

  • 单纯扩散
  • 促进扩散
  • 主动运输(含基团转位)

第36页:单纯扩散的特点

扩散是非特异性的营养物质吸收方式:营养物质通过细胞膜中的含水小孔,由高浓度的胞外环境向低浓度的胞内扩散。

  • 在扩散过程中营养物质的结构不发生变化,既不与膜上的分子发生反应,本身的分子结构也不发生变化
  • 运输速率与胞内外营养物质的浓度差有关,随浓度差降低而减小,直到浓度相同
  • 不需要代谢能,因此物质不能进行逆浓度运输
  • 膜上含水小孔的大小和形状对被扩散的物质分子有一定选择性,通常分子量小、脂溶性、极性小的营养物质容易吸收

第37页:促进扩散的特点

在促进扩散过程中:

  • 营养物质本身在分子结构上不会发生变化
  • 不消耗代谢能量,故不能进行逆浓度运输
  • 运输的速率由胞内外该物质的浓度差决定
  • 需要细胞膜上的载体蛋白(透过酶)参与物质运输
  • 被运输的物质有高度的立体专一性

促进扩散多见于真核微生物中,例如通常在厌氧生活的酵母菌中,某些物质的吸收和代谢产物的分泌是通过这种方式完成的。

第38页:主动运输的特点

物质在主动运输的过程中:

  • 消耗代谢能
  • 可以进行逆浓度运输
  • 需要载体蛋白参与
  • 对被运输的物质有高度的立体专一性

不同微生物主动运输所需能量的来源不同:

  • 好氧微生物中直接来自呼吸能
  • 厌氧微生物主要来自化学能
  • 光合微生物中则主要来自光能

主动运输是微生物吸收营养物质的主要方式。

第39页:主动运输的四种方式

  • 初级主动运输
  • 次级主动运输
  • 基团转位
  • Na⁺,K⁺—ATPase 系统

第40页:初级主动运输

初级主动运输是一种由电子传递系统、ATPase 或细菌视紫红质引起的质子运输方式。不同营养类型的微生物初级主动运输的方式不同(好氧情况、厌氧情况、光合微生物),但最终造成细胞膜内外质子浓度差,使膜处于充能状态。

第41页:次级主动运输

在细胞膜内外质子浓度差消失的过程中偶联其他物质的运输,即次级主动运输。

根据质子与其他物质运输的方向差异分为三种形式:

  • 同向运输
  • 逆向运输
  • 单向运输

第42页:基团转位的特点

基团转位是一种特殊的主动运输:与普通的主动运输相比,营养物质在运输的过程中发生了化学变化,其余特点与主动运输相同。

基团转位主要存在于厌氧微生物中,也主要用于单(或双)糖与糖的衍生物,以及核苷与脂肪酸的运输。

第43页:大肠杆菌吸收糖的基团转位

大肠杆菌吸收糖依赖于磷酸烯醇式丙酮酸—糖磷酸转移酶系统,运输步骤如下:

  • 热稳定蛋白的激活:PEP + HPr —(酶1)→ 丙酮酸 + P-HPr
  • 糖被磷酸化后运入膜内:P-HPr + 糖 —(酶2)→ 糖-P + HPr

第44页:钠钾ATP酶系统

Na⁺,K⁺—ATPase 系统是位于细胞膜上的一种离子通道蛋白,其作用是通过该蛋白构象的改变,把细胞内的 Na⁺ 运出细胞,同时将 K⁺ 运回细胞内,即实现 Na⁺ 与 K⁺ 的置换。

细胞内高浓度 K⁺ 是许多酶的活性和蛋白质合成所必需的。

第45页:膜泡运输

膜泡运输
原生动物吸收营养物质的方式,有胞吞和胞饮两种类型。

胞吞摄取颗粒状物质,胞饮摄取液体或溶解性物质,属于真核微生物特有的吸收方式。

第46页:四种运输方式的比较表

四种运输营养物质方式的比较
比较项目单纯扩散促进扩散主动运输基团转位
特异载体蛋白无有有有
运输速度慢快快快
物质运输方向由浓至稀由浓至稀由稀至浓由稀至浓
胞内外浓度相等相等胞内浓度高胞内浓度高
运输分子无特异性特异性特异性特异性
能量消耗不需要不需要需要需要
运输后物质的结构不变不变不变改变
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