22 第四节分光光度测量方法.ppt

第1页：第四节 分光光度测定方法

第五章紫外-可见分光光度法一、普通分光光度法二、示差分光光度法三、双波长分光光度法四、导数分光光度法第四节分光光度测定方法

第2页：一、普通分光光度法

• 一、普通分光光度法1.单组分的测定通常采用A-C标准曲线法定量测定。
• 2.多组分的同时测定⑴若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。⑵若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。Aλ1=εaλ1bca＋εbλ1bcbAλ2=εaλ2bca＋εbλ2bcb

第3页：二、示差分光光度法

二、示差分光光度法（示差法）•普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs<cx)。则：Ax=εbcxAs=εb csΔＡ＝Ａx－Ａs=εb(cx－cs）=εbΔc测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔＡ。

第4页：二、示差分光光度法（续）

示差分光光度法（示差法）ΔA＝Ax－As=εb(cx－cs）=εbΔc测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔA。示差法测得的吸光度与Δc呈直线关系。由标准曲线上查得相应的Δc值，则待测溶液浓度cx：cx=cs+ Δc

第5页：示差法标尺扩展原理

示差法标尺扩展原理：普通法：cs的T=10%；cx的T=5%示差法：cs做参比，调T=100%则：cx的T=50%；标尺扩展10倍

第6页：三、双波长分光光度法

三、双波长分光光度法不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。ΔA＝Aλ2－Aλ1＝(ελ2－ελ1)b c两波长处测得的吸光度差值ΔA与待测组分浓度成正比。ελ1和ελ2分别表示待测组分在λ1和λ2处的摩尔吸光系数。

第7页：关键问题

关键问题:测量波长λ2和参比波长λ1的选择与组合以两组分x和y的双波长法测定为例：设：x为待测组分，y为干扰组分，二者的吸光度差分别为:ΔAx和ΔAy，则该体系的总吸光度差ΔAx+y为：ΔAx+y=ΔAx+ΔAy如何选择波长λ1、λ2有一定的要求。

第8页：选择波长组合λ

选择波长组合λ1、λ2的基本要求是：⑴选定的波长λ1和λ2处干扰组分应具有相同吸光度，即：ΔAy =ΔAyλ2－ΔAyλ1= 0故：ΔAx+y =ΔAx=(εxλ2－εxλ1)bcx此时：测得的吸光度差ΔA只与待测组分x的浓度呈线性关系，而与干扰组分y无关。若x为干扰组分，则也可用同样的方法测定y组分。可采用作图法选择符合上述两个条件的波长组合。⑵在选定的两个波长λ1和λ2处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。

第9页：四、导数分光光度法

四、导数分光光度法导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。利用吸光度(或透光度)对波长的导数曲线来进行分析：Ｉ＝Ｉ0e-εbc假定入射光强度Ｉ0在整个波长范围内保持恒定：dI0/dλ＝0则：dI/dλ＝－Ｉ0bce-εbcdε/dλ＝－Ｉ0bcdε/dλ

第10页：四、导数分光光度法（续）

导数分光光度法dI/dλ＝－Ｉ0bcdε/dλ一阶导数信号与试样浓度呈线性关系；测定灵敏度依赖于摩尔吸光系数对波长的变化率dε/dλ。吸收曲线的拐点处dε/dλ最大，故其灵敏度最高(见图）。同理可以导出其二阶和三阶导数光谱（略）

第11页：本节内容导航页

请选择内容：第一节基本原理第二节紫外-可见分光光度计第三节显色与测量条件的选择第四节分光光度测定方法第五节有机合物紫外光谱解析结束