第1页：第十一章DNA的复制
第十一章DNA的复制
- 第十一章DNA的复制第一节半保留复制的验证
- 半保留模型（semioconservetivemodel）
- 全保留复制模型(conservetivemodel)
- 分散模型(Dispersivemodel)。
第2页：
第3页：验证半保留复制的实验一、Meselso
验证半保留复制的实验一、Meselson-Stahl实验二、Taylar实验三、姐妹染色单体差别染色方法（sister-chromatid differential staining）5溴脱氧尿嘧啶（5-Bromodeoxy uridine，简称BUdR）斑色染色体（Harlequin chromosome）四、Cairns复制模型—θ型复制
第4页：
第5页：图11-4 Taylor
图11-4 Taylor：图11-4 Taylor 蚕豆根尖放射自显影实验。(a)按半保留复制预期DNA在复制过程中标记情况；(b)实验结果染色体放射自显影的图示。
说明：本页为课件原图，图示内容需对照原课件图片核对。
第6页：
第7页：
第8页：
第9页：第二节复制的起点、方向和终点
第二节复制的起点、方向和终点一. 研究方法：1. 用同位素标记电镜观察及变性法2. 用噬菌体插入标记法同步培养不同步培养3.变性定性法（denaturationmapping）4. 双向电泳法
第10页：
第11页：
第12页：图11-11 不同步培养时各标记的拷贝数
图11-11 不同步培养时各标记的拷贝数：图11-11不同步培养时各标记的拷贝数不同复制起点标记的拷贝数应最多
说明：本页为课件原图，图示内容需对照原课件图片核对。
第13页：
第14页：原核的复制起点和方向 E.coli
原核的复制起点和方向 E.coli
- 二、原核的复制起点和方向
- E.coli定点、双向对称复制。
- T7在近一端的17％处开始，向两端延伸。
- 枯草杆菌有固定的起始点，双向不对称复制。
- 质粒R6K早期为单向复制，复制了约1/5基因组进行时双向复制。
- 质粒ColE1有固定起始点，但却为单向复制。
- mtDNA进行D（displacedloop）环复制
- 真核有多个复制起点（i），双向等速复制。
第15页：
第16页：D环复制
D环复制
第17页：第三节DNA复制突变型的筛选
第三节DNA复制突变型的筛选一.根据温度敏感性筛选二.同位素标记法筛选三.5－溴尿嘧啶掺入法四.质粒温度敏感性的筛选五.根据抗药性筛选六.根据与突变有关的生物学功能筛选七.快停突变与慢停突变
第18页：
第19页：第四节原核生物复制的酶系统一.DNA
第四节原核生物复制的酶系统一.DNA
- 第四节原核生物复制的酶系统一.DNA合成酶DNA聚合酶的共同特点是：
- （1）需要提供合成模板；
- （2）不能起始新的DNA链，必须要有引物提供3'－OH；
- （3）合成的方向都是5‘→3’
- （4）除聚合DNA外还有其它功能。
第20页：表11-1 E.coli 中的三种DNA
表11-1 E.coli 中的三种DNA
表11-1 E.coli 中的三种DNA多聚酶DNApolⅠDNApolⅡDNApolⅢ结构分子量109KD90KD900KD构成单体单体异多聚体分子数/细胞400？10-20酶活性：5→3`聚合酶+++3`→5`外切酶+++5`→3`外切酶+－－(可切单链)突变体突变位点polApolBpolC(dnaE),dnaN,dnaZX,dnaQ,dnaT突变表型修复有缺陷能修复阻止复制
说明：本页原表由课件图片提取，文字与数字粘连、列边界无法安全切分，此处保留原文；表格结构需对照课件原图人工补录。
第21页：表11-1 E.coli 中的三种DNA
表11-1 E.coli 中的三种DNA
- (一). DNA聚合酶I的结构DNA聚合酶有6个结合位点：
- (1) 模板结合位点；
- (2) 引物结合位点；
- (3) 引物3‘－OH结合位点；
- (4) 底物dNTP结合位点；
- (5) 5‘→3’外切酶结合位点；
- (6) 3'→5'校正位点。
第22页：
第23页：
第24页：第24页内容要点
第24页内容要点
- (二). DNA聚合酶Ⅰ的功能
- 1.5‘→3’聚合功能
- 2.3‘→5’外切活性
- 3.5‘→3’外切活性(1)切口平移（nicktranslation）；(2)链的置换；(3)模板转换（template-switching）
- 4.内切酶活性
第25页：
第26页：
第27页：
第28页：第28页内容要点
(三)DNA多聚酶Ⅲ的结构
第29页：
第30页：
第31页：全酶在DNA上的装配分为三个阶段
全酶在DNA上的装配分为三个阶段
- 全酶在DNA上的装配分为三个阶段：
- （1）一个β二聚体加上一个γ复合体识别引物模板形成一种前起始复合物。
- （2）DNA在于β,γ复合体结合的位点构象发生改变，而对核心酶产生了高亲和。使核心酶能与DNA结合。
- （3）τ二聚体结合核心聚合酶，使其二聚化。
第32页：DNA连接酶其作用机制是分三步进行
DNA连接酶其作用机制是分三步进行
- 二. DNA连接酶其作用机制是分三步进行：
- 1、E＋ATP→E－AMP＋ppi在E.coli中，E＋NAD→E－AMP＋NMN（烟酰胺单核苷酸）
- 2、E-AMP上的AMP转移到DNA的5‘-PO4上使其活化
- 3、活化的5‘－PO4与相邻的3’－OH作用形成3‘－5’磷酸二酯键，并释放出AMP。
第33页：单链结合蛋白
单链结合蛋白
- 三. 单链结合蛋白
- 又称为双螺旋去稳定蛋白（helix destabilizingprotein）
- 由177个aa组成
- 在E.coli 中以四聚存在
- 分子量为74KDa
- 在原核中SSB与DNA结合表现出协同效应。（1）SSB之间的相互作用；（2）第一个SSB和DNA的结合改变了DNA的结构。
第34页：解旋酶
四.解旋酶(helicase)
第35页：第五节原核生物
- 第五节原核生物，噬菌体和病毒的复制起始和终止
- 一.环状DNA的复制
第36页：
第37页：复制起始区的结构特点
复制起始区的结构特点
- 复制起始区的结构特点是：
- （1）富含A－T，这可能和双链易于解开起始复制有关；
- （2）含有多个回文结构（9－14个GATC）8个GATC较保守,CATC中的“A”已甲基化;
- （3）具有4个反向重复顺序，作为蛋白结合位点；
- （4）此顺序的右侧毗邻区域有两个起动子，其可能的作用是：①转录产生引物；②产生复制必要的蛋白；③产生调节功能的RNA；④起转录激活作用。
第38页：
第39页：
第40页：
第41页：
第42页：
第43页：
第44页：
第45页：
第46页：
第47页：
