第1页：1968年Gilbert提出滚环复制模
1968年Gilbert提出滚环复制模型:（1）共价延伸；（2）模板链和新合成的链分开;（3）不需RNA引物，在正链3‘－OH上延（4）只有一个复制叉;（5）形成多联体（concatemer ）;
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第3页：滚环复制的电镜照片
滚环复制的电镜照片
第4页：哪些DNA进行滚环复制?真核rDNA
哪些DNA进行滚环复制?真核rDNA的扩增,F因子DNA的转移,λ裂解途经的复制, φX174,M13.G4等单链环状DNA噬菌体第二阶段复制都是进行滚环复制的.
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第8页：DNA末端起始复制 线性双链DNA
DNA末端起始复制 线性双链DNA
- 二.DNA末端起始复制
- 线性双链DNA的复制有的是从一端开始的:腺病毒（Adenovirus）φ29DNAs脊髓灰质病毒（poliovirus)
- 腺病毒DNA全长35937bp,线性双链，
- 两端各有反向重复顺序103～162bp，两末端各有50bp为复制起点。
- 其复制是以单链置换（stranddisplacement）形成一个大的茎环或叫平锅形结构来进行的。
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第11页：复制的终止
复制的终止
- 三.复制的终止
- 1.E.coli的复制终止
- 现已发现有两个终止区域（terE,D,A和terC,B），位于相遇点的另一侧100Kb处。每一终止顺序对某一方向移动的复制叉来说是特异的。
- ter顺序有一个23bp的区域，在体外可导致复制的终止，但其功能显示了一定的方向性。
- 终止需要tus(terminusutilizationsubstance)基因的产物Tus(36kD)，Tus能识别ter保守顺序，并阻止复制叉继续前进。
- ter-Tus复合物可能通过抑制螺旋酶来实行终止
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第14页：第六节复制的过程
第15页：E.colidUTPase
- E.colidUTPase，它能使dUTP变成dUMP，dUMP是不能作为DNA合成的底物，这样它就不再能加入DNA中。
- 尿嘧啶N-糖苷酶（uracil N-glycosylase），它可以切断混合尿苷的糖苷键，形成无Pu和Py位点（apurinic or apyrimidinic ，AP），再由AP内切酶在AP位点切出一个缺口，进一步进行切除修复。
第16页：以下实验证实了这个解释
以下实验证实了这个解释
- 以下实验证实了这个解释：
- (1)在dut -突变体（dUTPase缺失）中冈崎片段比在dut +中为短。这是因为U掺入机会增加；
- (2)在ung-（尿嘧啶N-糖苷酶缺失）突变体中，新合成的DNA约有一半由片段组成。
- (3)因为尿嘧啶N-糖苷酶缺失，不会切除U的糖苷链，也就不会出现AP位点，所以碱沉淀时不易断裂，从而保持了半不连续的原貌。
- 在dut-,ung-双突变体中，结果和实验（2）相同，更进一步证实了此推测。
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第25页：酵母的自主复制区
酵母的自主复制区
- 酵母的自主复制区
- ARS(autonomously replicationg sequence)
- 发挥复制起点的功能，但是过量的。
- 酵母染色体Ⅳ的着丝粒附近为ARS1序列
- ARS1分为A,B,C三个功能区, A,B起主要作用,C起次要作用。
- A区为15bp,其中11个保守，称ACS(ARS consensus sequence)。有复制起始子的功能
- B区约为80bp,含B1,B2,B3三个功能区。
- B3是ABF1（ARS-binding factor 1）结合区，
第26页：酵母的复制
酵母的复制
第27页：ORC
ORC
- ORC：由6个亚基组成相当于Dna A和λ的O蛋白，与A/B1结合，结合于游离的DNA
- Cdc6:相当于DnaC,及λ的P蛋白，使Mcm蛋白结合到复合体上。此对在Origin上起始复制是必须的。
- Mcm: DnaB 螺旋酶。即licensing factor
- ABF1（转录因子）结合于B3
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第29页：原核和真核生物复制体系的比较 E.co
原核和真核生物复制体系的比较 E.co
- 原核和真核生物复制体系的比较
- E.coliλ SV40/人酵母功能
- DnaA O T抗原ORC 起始蛋白
- DnaB DnaB T抗原MCM 解旋酶
- DnaC P ? Cdc6 装配因子
- DnaG DnaG Polα-引发酶Polα-引发酶引发酶
- PolⅢ的α亚基Polδ Polδ,Polε 聚合酶
- PolⅢ的ε亚基Polδ Polδ,Polε 校正
- PolⅢ的
- 亚基PCNA PCNA 滑动钳
- 复合体RF-C RF-C 滑动钳装配器
- SSB RF-A RF-A 单链结合蛋白
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第32页：PvuBg1 Bam H1Bam pB
PvuBg1 Bam H1Bam pBR322 TEL TEL四膜虫rDNAARSPvu Bg1BamH连接Pvu 转化酵母Pvu传几代酵母DNAPvu Pvu连接转化酵母传几代图11-56 四膜虫与酵母TEL的拼接以及酵母细胞将其特有的TEL加到四膜虫的TEL上(参考Shampg,J and Blackburn et al: 《Nature》1984,310:154-157)
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