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03 第3章 核酸.ppt

页数:56页文件大小:5.57 MB来源: 食品与生物化学ppt课件

本课件从核酸的发现与功能讲起,说明碱基、戊糖、核苷与核苷酸的组成关系,重点解析DNA双螺旋、三级结构与超螺旋,以及RNA的分类、tRNA三叶草结构和核酸的紫外吸收与变性复性。

第三章核酸Nucleic Acid图示页,配合「核酸的发现与概述」一节说明其结构要点,建议对照原课件图片查看
概述、化学组成、结构、性质主要内容图示页,配合「核酸的发现与概述」一节说明其结构要点,建议对照原课件图片查看
概述一、核酸的发现,COHEN-DNA,Cloning(克隆)1976 DNA Sequencing(序列分析
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第1页:第三章核酸Nucleic Acid

第三章核酸Nucleic Acid

第2页:概述、化学组成、结构、性质主要内容

  • 概述
  • 化学组成
  • 结构
  • 性质主要内容

第3页:概述一、核酸的发现

  • 概述一、核酸的发现1868 MEISCHER-从脓球发现“核素”1944 AVERY et al-肺炎球菌转化实验1952 HERSHEY,CHASE-噬菌体标记实验1950 CHARGAFFet al-CHARGAFF1953 WATSON,CRICK-DNA双螺旋1973 BOYER
  • COHEN-DNA
  • Cloning(克隆)1976 DNA Sequencing(序列分析)1990 HumanGenome Project

第4页:二、功能和种类

二、功能和种类功能:核酸是生物遗传的物质基础种类:1、脱氧核糖核酸(DNA,细胞核)遗传信息的贮存和携带者,生物的主要遗传物质。

在真核细胞中,DNA主要集中在细胞核内,线粒体和叶绿体中均有各自的DNA。

原核细胞没有明显的细胞核结构,DNA存在于称为类核的结构区。

每个原核细胞只有一个染色体,每个染色体含一个双链环状DNA。

2、核糖核酸(RNA,胞质)主要参与遗传信息的传递和表达过程,细胞内的RNA主要存在于细胞质中,少量存在于细胞核中,病毒中RNA本身就是遗传信息的储存者。

可以分为mRNA、tRNA和rRNA三种另外在植物中还发现了一类比病毒还小得多的侵染性致病因子称为类病毒,它是不含蛋白质的游离的RNA分子,还发现有些RNA具生物催化作用(ribozyme)。

第5页:核酸的功能与种类(图示页)

mRNA:占全部RNA的5%,可以作为合成蛋白质的直接模板。

tRNA:占全部RNA的16%,在蛋白质合成中起转运AA的功能。

rRNA:占全部RNA的80%,是构成核糖体的成分,原核细胞中有5S、16S、28S三种,真核细胞中有5S、5.8S、18S、28S四种。

基因转录翻译多肽折叠活性蛋白

第6页:化学组成

化学组成组成元素:C、H、O、N、PP的含量比较稳定,占9%-10%,通过测定P的含量来推算核酸的含量(定磷法)。

任何核酸都含磷酸,所以核酸呈酸性。

基本组成单位:核苷酸核苷酸磷酸核苷戊糖碱基核酸

第7页:嘌呤嘧啶

  • 嘌呤嘧啶
  • 腺嘌呤AdenineA
  • 鸟嘌呤guanineG一、碱基的基本类型

第8页:胞嘧啶C胸腺嘧啶T尿嘧啶

胞嘧啶C胸腺嘧啶T尿嘧啶U

第9页:二、戊糖组成

二、戊糖组成核酸的戊糖有两种。DNA所含的糖为β-D-2-脱氧核糖;RNA所含的糖则为β-D-核糖。

第10页:三、核苷碱基

三、核苷碱基+戊糖=核苷1’2’3’4’5’(OH)1’2’3’4’5’(OH)

第11页:四、核苷酸核苷

四、核苷酸核苷+磷酸=核苷酸核苷酸按碱基和戊糖的不同分以下几类:核苷酸脱氧核苷酸腺嘌呤核苷酸脱氧腺嘌呤核苷酸鸟嘌呤核苷酸脱氧鸟嘌呤核苷酸胞嘧啶核苷酸脱氧胞嘧啶核苷酸尿嘧啶核苷酸脱氧胸腺嘧啶核苷酸

第12页:OH腺嘌呤核苷酸

OH腺嘌呤核苷酸(AMP)其他三种核苷酸只在碱基部分有所不同,接上鸟嘌呤即为鸟嘌呤核苷酸,接上胞嘧啶即为胞嘧啶核苷酸

第13页:脱氧腺嘌呤核苷酸

脱氧腺嘌呤核苷酸(dAMP)H同样其他三种脱氧核苷酸只在碱基部分有所不同,接上鸟嘌呤即为鸟嘌呤脱氧核苷酸,接上胞嘧啶即为胞嘧啶脱氧核苷酸

第14页:结构脱氧核糖核酸

结构脱氧核糖核酸(DNA)结构核酸核糖核酸(RNA)结构

第15页:

第16页:一级结构

一级结构:组成核酸的诸核苷酸之间连键的性质,以及核苷酸排列的顺序.从一级结构上阐述DNA:是由数量极其庞大的四种脱氧核糖核苷酸,通过3′,5′-磷酸二酯键彼此连接起来的直线形或环形分子。

二级结构:核苷酸链内或链之间通过氢键折叠卷曲而成的双螺旋结构.绝大多数为右旋.三级结构:是指DNA分子(双螺旋)通过扭曲和折叠所形成的特定构象,包括不同二级结构单元间的相互作用、单链与二级结构单元间的相互作用以及DNA的拓扑特征

第17页:结构特点

结构特点:包含A\G\C\T四种碱基两个脱氧核苷酸通过3′,5′-磷酸二酯键连接碱基之间通过氢键配对,A与T配对,G与C配对,G\C之间通过三个氢键连接,A\T对通过两个氢键连接.(图)这种碱基之间互相匹配的情形称为碱基互补。

因此,当一条核苷酸链的碱基序列确定以后,即可推知另一条互补核苷酸链的碱基序列

第18页:

第19页:

第20页:双螺旋分子中糖分子与纵轴平行

双螺旋分子中糖分子与纵轴平行,与碱基平面垂直磷酸基与脱氧核糖在外侧,彼此之间通过磷酸二酯键相连接,形成DNA的骨架

第21页:除B-DNA外还有螺体较宽而浅

除B-DNA外还有螺体较宽而浅的A-DNA和磷酸基在多核苷酸骨架上的分布呈Z字形的CGCGCG寡聚体Z-DNA

第22页:维持双螺旋结构

  • 维持双螺旋结构稳定性的力
  • 一是互补碱基对之间的氢键
  • 主要的力,是碱基堆集力.碱基堆集力是由于芳香族碱基的π电子之间相互作用而引起的,DNA分子中碱基层层堆集,在DNA分子内部形成了一个疏水核心,核心内几乎没有游离的水分子,所以使互补的碱基之间形成氢键。
  • 三是磷酸残基上的负电荷与介质中的阳离子之间形成的离子键。

第23页:

第24页:除双螺旋结构

除双螺旋结构外,还有极少数的DNA分子是三螺旋结构的.

第25页:(1)大多数的原核生物为共价

(1)大多数的原核生物为共价封闭的环状双螺旋分子可再次螺旋化—超螺旋结构超螺旋结构有两种:负超螺旋(右旋)正超螺旋(左旋)

第26页:DNA双螺旋

DNA双螺旋为右旋螺旋。

细胞中的环状DNA一般呈负超螺旋,即右旋螺旋不足导致部分碱基不形成配对,分子通过整体拓扑学上的右旋来补足右旋螺旋的不足,在数学上呈1:1,即分子整体右旋一圈来补双螺旋上的一圈不足。

负超螺旋右旋

第27页:正超螺旋的定义

正超螺旋为双螺旋旋转过度,通过分子整体的左旋来解去过度的螺旋。正超螺旋左旋

第28页:(2)也有开环DNA

(2)也有开环DNA(open circular DNA, ocDNA)也称松环DNA(relaxed circular DNA, rcDNA)当超螺旋型DNA的一条链上出现一个缺口时,超螺旋结构就被松开,而形成开环型结构。

第29页:(3).连环DNA

(3).连环DNA(Catenanes DNA)单体二聚体

第30页:

第31页:基因(gene)

  • 基因(gene):是染色体上的具有特定功能的一段DNA序列,是一种相对独立的遗传信息基本单位,它编码蛋白质、tRNA或rRNA分子,或者调节这样一段序列的转录。
  • 基因组:是一种生物结构建成和生命活动所需遗传信息的总和,即生物体的全套DNA序列。这些信息编码在细胞内的DNA分子中。对真核生物例如人类来说,细胞核内全部染色体分子的总和就是它们的基因组。
  • 基因芯片(Gene chip)又称DNA芯片、DNA微阵列(DNA microarray),是将大量的DNA片段按预先设计的排列方式固化在载体表面如硅片、玻片上,并以此为探针,在一定的条件下,与样品中待测的靶基因片段杂交,通过检测杂交后的信号,实现对靶基因信息的快速检测。常见并广泛应用的有cDNA微点阵和寡核苷酸原位合成两种。

第32页:一级结构

一级结构:为直线形多聚核苷酸,相对分子质量的差别极大.高级结构:包括二级结构和三级结构等.

第33页:1、分子较小,为直线型多核苷酸链

  • 1、分子较小,为直线型多核苷酸链。
  • 2、基本单位主要是CMP GMP AMP和UMP四种核苷酸
  • 3、磷酸二酯键,5’端向3’端延伸
  • 不像DNA那样具有严格的A=T,G=C的规律

第34页:tRNA一级结构的特点

  • tRNA一级结构的特点
  • 分子量25000左右,大约由70-90个核苷酸组成,沉降系数为4S左右。
  • 分子中含有较多的修饰成分。
  • 3‘-末端都具有CpCpAOH的结构。
  • tRNA占全部RNA的16%,tRNA的生物功能是在蛋白质生物合成过程中转运氨基酸。细胞内tRNA的种类很多,估计有50多种。每一种氨基酸都有与其相对应的一种或几种tRNA。

第35页:mRNA一级结构的特点

  • mRNA一级结构的特点
  • 真核细胞mRNA的3‘-末端有一段长达200个核苷酸左右的聚腺苷酸(polyA),称为“尾结构”,5’-末端有一个甲基化的鸟苷酸,称为”帽结构“。

第36页:极大多数真核细胞mRNA

  • 极大多数真核细胞mRNA在3‘-末端有一段长约200核苷酸的polyA。polyA是在转录后经polyA聚合酶的作用而添加上去的。原核生物的mRNA一般无polyA,但某些病毒mBNA也有3’-polyA,polyA可能有多方面功能,与mRNA从细胞核到细胞质的转移有关;与mRNA的半寿期有关,新合成的mRNA,.polyA链较长,而衰老的mRNA,polyA链缩短
  • mRNA的碱基组成与DNA的十分相当。所以有时把它叫作D-RNA。mRNA在代谢上很不稳定,是合成蛋白质的模板,每种多肽链都由一种特定的mRNA负责编码。所以细胞内mRNA的种类是很多的,但每一种mRNA的数量却极少。

第37页:rRNA动物细胞核糖体rRNA有四类

rRNA动物细胞核糖体rRNA有四类:5SrRNA,5.8SrRNA,18SrRNA,28SRNA。

许多rRNA的一级结构及由一级结构推导出来的二级结构都已阐明,但是对许多rRNA的功能迄今仍不十分清楚。

rRNA约占全部RNA的30%左右,是构成核糖体的骨架,大肠杆菌核糖体中的rRNA有三类:5S rRNA,16S RNA,23S rRNA。

这些不同的rRNA的核苷酸排列顺序是不同的,它们能与细菌染色体DNA的不同部位杂交。

动物细胞核糖体中的rRNA有三类

5S rRNA,18S RNA,28SrRNA及5.8S rRNA。

第38页:RNA的高级结构特点

  • RNA的高级结构特点
  • RNA是单链分子,因此,在RNA分子中,并不遵守碱基种类的数量比例关系,即分子中的嘌呤碱基总数不一定等于嘧啶碱基的总数。
  • RNA分子中,部分区域也能形成双螺旋结构,不能形成双螺旋的部分,则形成突环。这种结构可以形象地称为“发夹型”结构。

第39页:

第40页:发卡式结构

发卡式结构A-U, C-G配对

第41页:在RNA的双螺旋结构

  • 在RNA的双螺旋结构中,碱基的配对情况不象DNA中严格。G除了可以和C配对外,也可以和U配对。G-U配对形成的氢键较弱。不同类型的RNA,其二级结构有明显的差异。
  • tRNA中除了常见的碱基外,还存在一些稀有碱基,这类碱基大部分位于突环部分.

第42页:tRNA的高级结构

tRNA的高级结构tRNA的二级结构都呈”三叶草”形状,在结构上具有某些共同之处,一般可将其分为五臂四环:包括氨基酸接受区、反密码区、二氢尿嘧啶区、TψC区和可变区。

除了氨基酸接受区外,其余每个区均含有一个突环和一个臂。

第43页:携带氨基酸辨认并结合氨基酰tRNA

携带氨基酸辨认并结合氨基酰tRNA合成酶识别mRNA上的密码识别并结合核蛋白体氨基酸臂DHU臂反密码臂可变臂TΥC臂

第44页:(1)氨基酸接受区包含有tRNA

(1)氨基酸接受区包含有tRNA的3’-末端和5’-末端,3’-末端的最后3个核苷酸残基都是CCA,A为核苷。

氨基酸可与其成酯,该区在蛋白质合成中起携带氨基酸的作用。

(2)反密码区与氨基酸接受区相对的一般含有7个核苷酸残基的区域,其中正中的3个核苷酸残基称为反密码

第45页:(3)TψC区该区与二氢尿嘧啶区相对

(3)TψC区该区与二氢尿嘧啶区相对,假尿嘧啶核苷—胸腺嘧啶核糖核苷环(TψC)由7个核苷酸组成,通过由5对碱基组成的双螺旋区(TψC臂)与tRNA的其余部分相连。

除个别例外,几乎所有tBNA在此环中都含有TψC。

(4)可变区位于反密码区与TψC区之间,不同的tRNA该区变化较大。

第46页:tRNA的三级结构

  • tRNA的三级结构
  • 在三叶草型二级结构的基础上,突环上未配对的碱基由于整个分子的扭曲而配成对,目前已知的tRNA的三级结构均为倒L型

第47页:

第48页:

第49页:性质(一)一般性质

性质(一)一般性质:分子大小:DNAMr106~1010或更大,RNAMr104~106或更大性状:DNA为白色纤维状固体,而RNA为白色粉末。

溶解度:DNA和RNA均不溶于一般的有机溶剂,微溶于水,但它们的钠盐在水中溶解度较大。

第50页:(二)核酸的两性性质

(二)核酸的两性性质及等电点核酸分子中既含有酸性基团(磷酸基)也含有碱性基团(氨基),因而核酸也具有两性性质。

一般呈酸性,(在中性溶液中带负电荷),微溶于水,不溶于有机溶剂。

第51页:核酸的性质(图示页)

pK1′= 0.9第一磷酸基pK3′= 6.2第二磷酸基pK2′= 3.7含氮环腺嘌呤核苷酸pK1′= 0.7第一磷酸基pK3′= 6.1第二磷酸基pK2′= 3.7含氮环烯醇式羟基鸟嘌呤核苷酸(三)核酸的水解pK1′= 0.8第一磷酸基pK3′= 6.3第二磷酸基pK2′= 4.3含氮环胞嘧啶核苷酸pK1′= 1.0第一磷酸基pK3′= 6.4第二磷酸基烯醇式羟基尿嘧啶核苷酸

第52页:(四)紫外吸收在核酸分子中

(四)紫外吸收在核酸分子中,由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系,因而具有独特的紫外线吸收光谱,一般在260nm左右有最大吸收峰,可以作为核酸及其组份定性和定量测定的依据。

第53页:(五)变性、复性与杂交1、变性是指

(五)变性、复性与杂交1、变性是指核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间的氢键断裂,变成单链结构的过程。

部分双螺旋解开无规则线团链内碱基配对这是一个是跃变过程,伴有A260增加(增色效应),DNA的功能丧失。

温度升高

酸碱度改变、pH(>11.3或<5.0)

有机溶剂如甲醛和尿素、甲酰胺等

低离子强度都可引起变性。

第54页:2、复性在一定条件

2、复性在一定条件下,变性DNA单链间碱基重新配对恢复双螺旋结构,伴有A260减小(减色效应),DNA的功能恢复。

第55页:3、杂交不同来源

3、杂交不同来源的DNA单链间或单链DNA与RNA之间只要有碱基配对的区域,在复性时可形成局部双螺旋区,称核酸分子杂交(hybridization)

第56页:Tm:熔解温度

Tm:熔解温度(melting temperature)DNA的变性发生在一个很窄的温度范围内,通常把热变性过程中A260达到最大值一半时的温度称为该DNA的熔解温度,用Tm表示。

Tm的大小与DNA分子中(G+C)的百分含量成正相关,测定Tm值可推算核酸碱基组成及判断DNA纯度。

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