18 实验十六 酱油中山梨酸、苯甲酸的测定.doc

第1页：薄层色谱法测定山梨酸、苯甲酸

原理

样品酸化后用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，将提取液浓缩后点于聚酰胺薄层板上，展开显色后根据薄层板上山梨酸、苯甲酸的比移值与标准比较定性，并可进行概略定量。

试剂：异丙醇；正丁醇；石油醚（沸程 30-60℃）；乙醚（不含过氧化物）；氨水；6N 盐酸；无水乙醇；聚酰胺粉（200 目）；山梨酸标准溶液；苯甲酸标准溶液；展开剂（1）正丁醇-氨水-无水乙醇（7:1:2），（2）异丙醇-氨水-无水乙醇（7:1:2）；显色剂（0.04% 溴甲酚紫的 50% 乙醇溶液，用 0.1N 氢氧化钠溶液调至 pH 8）；4% 氯化钠酸性溶液。

标准溶液：精密称取 0.2000 克山梨酸，用少量乙醇溶解后移入 100 毫升容量瓶稀释至刻度；苯甲酸标准溶液同法配制，此二液每毫升均相当于 2 毫克标准物质。

源文件将山梨酸标准溶液浓度写作每毫升相当于 200 毫克，按 0.2000 克定容至 100 毫升计算应为每毫升 2 毫克，表中按标准值列出。

第2页：样品提取、制板与展开显色

样品提取：称取 2.5 克混合均匀的样品置于 25 毫升带塞量筒中，加 0.5 毫升 6N 盐酸酸化，用 15、10 毫升乙醚提取两次，每次振摇 1 分钟，合并上层醚提取液于另一 25 毫升带塞量筒；用 3 毫升 4% 氯化钠酸性溶液洗涤两次，静置 15 分钟，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入 25 毫升容量瓶并加乙醚至刻度混匀。吸取 10.0 毫升乙醚提取液分两次置于 10 毫升带塞离心管中，在约 40℃ 水浴上挥发干，加 0.10 毫升乙醇溶解残渣备用。

薄板制备：称取 1.6 克聚酰胺粉，加 0.4 克可溶性淀粉与约 5 毫升水研磨 3-5 分钟，立即倒入涂布器制成 10×8 cm、厚度 0.3 mm 的薄层板两块，室温干燥后于 80℃ 干燥 1 小时，取出置干燥器中保存。

点样与展开：在薄层板下端 2 cm 基线上用微量注射器点 1、2 微升样品液，同时各点 1、2 微升山梨酸、苯甲酸标准溶液；将薄板放入预先盛有展开剂的展开槽（槽内贴有滤纸），待溶剂前沿上展至 10 cm 取出挥干，喷显色剂，斑点呈黄色、背景为蓝色，与标准斑点比较定量。

第3页：山梨酸苯甲酸含量计算

计算：X = A × 1000 / [m × (V2 / 25) × (10 / V1) × 1000]，式中 X 为样品中山梨酸（苯甲酸）的含量（g/kg），A 为测定用样品液中山梨酸（苯甲酸）的含量（mg），m 为样品质量（g），V1 为加入乙醇的体积（ml），V2 为测定时点样的体积（ml），10 为测定时吸取乙醚提取液的体积（ml），25 为样品乙醚提取液总体积（ml）。

说明：此方法还可以同时测定果酱、果汁中的糖精。