10 实验八 氨基酸总量(氨态氮)的测定.doc

第1页：单指示剂甲醛滴定法

原理

氨基酸含羧基显酸性、含氨基显碱性，二者相互作用成为中性内盐；加入甲醛后氨基与甲醛结合、碱性消失，破坏内盐即可用碱滴定羧基，间接测定氨基酸量。

试剂：40% 中性甲醛溶液（以麝香草酚酞为指示剂用 1N NaOH 中和）、0.1% 麝香草酚酞乙醇溶液、0.100N 氢氧化钠标准溶液。

操作：称取一定量样品（约含 20 毫克左右氨基酸）于烧杯中（固体加水 50 毫升），加 2-3 滴指示剂，用 0.100N NaOH 溶液滴定至淡蓝色；加入中性甲醛 20 毫升，摇匀静置 1 分钟，此时蓝色应消失；再用 0.100N NaOH 溶液滴定至淡蓝色。记录两次滴定所消耗的碱液毫升数。

计算：氨基酸态氮（%）= N × V × 0.014 / W × 100，其中 N 为 NaOH 标准溶液当量浓度，V 为 NaOH 消耗总量（ml），W 为样品溶液相当的样品重量（g），0.014 为氮的毫克当量。

第2页：双指示剂甲醛滴定法

原理

与单色法相同，只是使用两种指示剂。双指示剂法结果与亚硝酸氮气容量法相近，单色法结果稍偏低：单指示剂法以麝香草酚酞终点 pH 9.2 判定，双指示剂法以中性红终点 pH 7.0 判定，从理论计算看双色滴定法较为准确。

试剂：除单指示剂法的三种试剂外，另需 0.1% 中性红（50% 乙醇溶液）。

操作：取相同的两份样品分别注入 100 毫升三角烧瓶。一份加中性红指示剂 2-3 滴，用 0.100N NaOH 滴定至终点（由红变琥珀色），记录用量 V1；另一份加麝香草酚酞 3 滴和中性甲醛 20 毫升，摇匀后以 0.100N NaOH 滴定至淡蓝色，记录用量 V2。

计算：氨基酸态氮（%）= N × (V2 - V1) × 0.014 / W × 100，其中 V2 为麝香草酚酞为指示剂时标准碱液消耗量（ml），V1 为中性红作指示剂时碱液消耗量（ml），N 为标准碱液当量浓度，W 为样品重量（g）。

第3页：氨基酸测定的脱色注意事项

注意事项：测定时若样品颜色较深，应加活性炭脱色之后再滴定，以免样品本身色泽干扰指示剂终点颜色的判断。