07 实验五 粗脂肪的定量测定.doc

第1页：索氏抽提法测定粗脂肪（样品准备）

原理

本法为重量法，用脂肪溶剂（乙醚或沸点 30-60℃ 的石油醚）将脂肪提出后称量，借助索氏提取器循环抽提；提取所得为含游离脂肪酸、磷脂、固醇、芳香油、色素及有机酸等的混合物，故称粗脂肪。

试剂及仪器：无水乙醚、海砂、索氏提取器、恒温水浴锅、烘箱、脱脂棉花、脱脂滤纸。

样品准备：称样量依脂肪含量而定，脂肪含量 10% 以下者称取 10-12 克，50-60% 者称取 2-4 克（可用测定水分后的样品）。样品在 80-100℃ 烘箱去水分，一般烘 4 小时并避免过热；冷却后准确称取一定量，必要时拌以精制海砂，无损移入滤纸筒内并用脱脂棉塞严，滤纸筒放入提取管内时不得高于虹吸部分。

第2页：抽提操作与称重计算

洗净的提取瓶烘干至恒重，加乙醚约至提取瓶容积的 1/2-2/3，按图连接各部分且不能漏气。加热提取应在电热恒温水浴中进行（水浴温度约 40-50℃），严禁火焰直接加热索氏提取器。

乙醚蒸汽由连接管上升至冷凝器，凝结滴入提取管，溶有脂肪的乙醚在液面超过虹吸管高度后流回提取瓶，如此循环抽提。调节水浴温度使乙醚每小时循环 3-5 次，抽提时间一般需 6-12 小时。

完全性判断：从提取管内吸取少量乙醚滴在洁净滤纸上，待乙醚挥干后滤纸上不留油迹即表示提取完全。提取完全后将乙醚蒸回提取管，待液面达到虹吸管最高处以前取下提取管。

称重计算：将提取瓶中乙醚全部蒸干，洗净外壁，置 105℃ 烘箱干燥至恒重，按下式计算：脂肪（%）= (W1 - W0) / W × 100，W1 为接受瓶和脂肪重量，W0 为接受瓶重量，W 为样品重量。

原文将提取瓶烘干温度写作 1.5℃，按索氏抽提法常规条件应为 105℃，此处按标准条件列出。

第3页：抽提法注意事项与结果校正

• 样品应干燥后研细，滤纸筒必须紧密，不得外漏样品，否则重做。
• 滤纸筒高度不能超过回流弯管，否则乙醚不易穿透样品，脂肪不能全部提出。
• 含多量糖及糊精的样品，先以冷水处理，干燥后连同滤纸一起放入提取器。
• 水浴温度不宜过高，以乙醚刚开始沸腾为宜（约 45℃），回流速度以每小时 8-12 次为宜。
• 所用乙醚必须无水，含水会抽出糖及无机物造成误差；若无无水乙醚可自制：1000 毫升乙醚加无水石膏 50 克，振摇数次，静置 10 小时以上蒸馏，收集 35℃ 以下馏液。
• 冷凝管上端最好接氯化钙干燥管，防止空气中水分进入并避免乙醚挥发污染实验室空气；无此装置可塞一团干脱脂棉。
• 烘干时瓶口向一侧倾斜 45° 放置，利于乙醚与空气对流；烘干时间不宜过长，无真空干燥箱时可在 100-105℃ 干燥 1.5-3 小时。
• 无乙醚时可用沸点 30-60℃ 的石油醚；使用乙醚或石油醚时切忌直接火加热，应用电热套、电水浴或电灯泡。

含水分样品测定脂肪时，可按下式计算原样品脂肪含量：脂肪（%）= (W1 - W0) / [W × (100 - A) / 100]，A 为 100 克样品中水分的含量（克）。

源文件该页中段混入一段与粗脂肪测定无关的耐盐性转基因番茄文献文字，属排版错乱，此处未纳入正文，建议对照原图核对。

第4页：酸水解法测定脂肪

原理

样品经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得游离及结合脂肪总量。

试剂与仪器：盐酸、95% 乙醇、乙醚、石油醚、100 毫升具塞刻度量筒。

操作：

1. 固体样品精密称取约 2 克置于 50 毫升大试管内，加水混匀后加盐酸；液体样品称取 10.0 克，加盐酸。
2. 试管置 70-80℃ 水浴中，每隔 5-10 分钟以玻璃棒搅拌一次，至样品消化完全为止，约需 40-50 分钟。
3. 取出试管加 10 毫升乙醇混合，冷却后将混合物移入 100 毫升具塞量筒，以 25 毫升乙醚分次洗试管并并入量筒；加塞振摇 1 分钟，小心开塞放气后再塞好，静置 12 分钟。
4. 用石油醚-乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪，静置 10-20 分钟待上部液体清晰，吸出上清液于已恒重的锥形瓶内；再加 5 毫升乙醚振摇静置，仍将上层乙醚吸出并入原锥形瓶。
5. 锥形瓶置水浴上蒸干，置 95-105℃ 烘箱干燥 2 小时，取出置干燥器内冷却 0.5 小时后称重。

第5页：酸水解法结果计算

计算：X = (m1 - m2) / m × 100，X 为样品中脂肪的含量（%），m1 为接受瓶与脂肪的质量（g），m2 为接受瓶的质量（g），m 为样品质量（g）。

源文件仅列出 m1 与 m2 两个符号，未给出样品质量符号，此处按标准算式补全为 m（样品质量）。