22 实验二十 水果中维生素c的测定.doc

第1页：2,6-二氯酚靛酚法原理与试剂

原理

还原型抗坏血酸能还原染料 2,6-二氯酚靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失，还原型抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸；在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料量与样品中维生素 C 含量成正比。

试剂：2% 草酸溶液（20 克草酸结晶稀释至 1000 ml）；1% 草酸溶液（取 2% 草酸溶液 500 ml 稀释至 1000 ml）；抗坏血酸标准溶液（准确称取 20 mg 抗坏血酸溶于 1% 草酸溶液，用 1% 草酸稀释至 100 毫升，置冰箱保存；使用时吸取 5 ml 于 50 毫升容量瓶用 1% 草酸定容，此使用液每毫升含 0.02 mg 维生素 C）。

标定：吸取标准使用液 5 ml 于三角烧瓶，加 6% 碘化钾溶液 0.5 ml、1% 淀粉溶液 3 滴，再以 0.001N 碘酸钾标准溶液滴定至淡蓝色。计算：抗坏血酸浓度（mg/ml）= V1 × 0.088 / V2，V1 为耗 0.001N 碘酸钾标准溶液的量（ml），V2 为所取抗坏血酸的量（ml），0.088 为 1 ml 0.001N 碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量（mg）。

第2页：染料配制标定与样品提取

2,6-二氯靛酚溶液：称取碳酸氢钠 52 mg 溶于 200 ml 沸水中，再称取 2,6-二氯靛酚 50 mg 溶解于上述碳酸氢钠溶液中，待冷置冰箱过夜，次日过滤置于 250 ml 量瓶中用水稀释至刻度摇匀；此液应贮于棕色瓶中冷藏，每星期至少标定 1 次。

标定：取 5 ml 已知浓度的抗坏血酸标准溶液，加 1% 草酸溶液 5 ml 摇匀，用上述染料溶液滴定至溶液呈粉红色于 15 秒不褪色为止。每毫升染料溶液相当于维生素 C 的毫克数即滴定度 T：T = C × V1 / V2，C 为抗坏血酸浓度（mg/ml），V1 为抗坏血酸的量（ml），V2 为消耗染料溶液量（ml）。

其他试剂：0.1N 碘酸钾溶液（精确称取干燥碘酸钾 0.3567 克用水稀释至 100 ml）；0.001N 碘酸钾溶液（吸取 0.1N 碘酸钾溶液 1 ml 稀释至 100 毫升，此溶液 1 ml 相当于抗坏血酸 0.088 mg）；1% 淀粉溶液；6% 碘化钾溶液。

源文件将 0.1N 碘酸钾溶液的配制写作「精确取干燥的碘酸钾 0.100 ml。0.3567 克用水稀释至 100 ml」，按标准方法应为称取 0.3567 克碘酸钾定容至 100 ml，此处按标准值列出。

第3页：维生素C滴定与说明

操作：称取适量（50.0-100.0 克）样品，加等量 2% 草酸溶液，倒入组织捣碎机中捣成匀浆；称取 10.00-30.00 克浆状样品（使其含抗坏血酸 1-5 mg）置于小烧杯中，用 1% 草酸溶液将样品移入 100 毫升容量瓶并稀释至刻度摇匀。将样液过滤，弃去最初数毫升滤液；若样液有色，用白陶土（应选脱色力强但对抗坏血酸无损失者）去色，然后迅速吸取 5-10 ml 滤液置于 50 ml 三角烧瓶，用标定的 2,6-二氯靛酚染料溶液滴定，直至溶液呈粉红色于 15 秒内不褪色为止。

计算：每百克样品中抗坏血酸毫克数 = V × T / W × 100，V 为滴定时所耗染料溶液的量（ml），T 为 1 ml 染料溶液相当于抗坏血酸标准溶液的量（mg），W 为滴定时所取滤液中含样品量（g）。

说明：试剂配制最好用重蒸馏水；样品取样后应浸泡在已知量 2% 草酸溶液中以免发生氧化；动性样品可用 10% 三氯醋酸代替 2% 草酸提取，含大量铁的样品可用 8% 醋酸溶液提取；整个操作要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化；滤液无色可不加白陶土，须加白陶土的要对每批新的白陶土测定回收率；滴定开始时染料要迅速加入，至红色不立即消失后再逐滴加入并不断振摇，以 15 秒钟红色不褪为终点；测定样品溶液时必须同时作空白对照并扣除空白滴定毫升数。

第4页：2,4-二硝基苯肼法原理与试剂

原理

用酸处理过的活性炭把还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，再继续氧化为二酮古乐糖酸；二酮古乐糖酸与 2,4-二硝基苯肼偶联生成红色的络合物，呈色强度与二酮古乐糖酸浓度成正比，可比色定量。

试剂：1% 草酸溶液；2% 草酸溶液；酸处理过的活性炭（取 200 克活性炭加 10% 盐酸 1000 ml 煮沸后抽气过滤，再用沸水 1000 ml 煮沸过滤，重复水洗至滤液中无高价铁离子，即 1% 硫氰化钾溶液试验不呈红色，于 100-120℃ 烘干）；2% 2,4-二硝基苯肼溶液（2 克溶于 100 ml 9N 硫酸中）；9N 硫酸溶液（浓硫酸 250 ml 慢慢倒入 750 ml 水中并搅拌）；10% 硫酸溶液；85% 硫酸溶液。

抗坏血酸标准溶液：精确称取 20 mg 抗坏血酸溶解在 1% 草酸中并稀释至 100 ml；吸取此液 50 ml 加 0.1 克活性炭振摇 1 分钟过滤，吸取滤液 5 ml 用 1% 草酸稀释至 100 毫升，此标准使用液每毫升含 10 μg 抗坏血酸。

第5页：2,4-二硝基苯肼法操作与标准曲线

操作：称取适量样品加等量 2% 草酸溶液于组织捣碎机中打成匀浆；取匀浆 20 克用 1% 草酸稀释至 100 ml 摇匀过滤。取滤液 10 ml 加 1% 草酸 10 ml（取滤液量视抗坏血酸含量而定，一般控制每毫升浓度为 1-10 μg），加 1 勺活性炭摇 1 分钟，静置过滤。各取滤液 2 毫升于样品管和样品空白管中，各管加 1 滴硫酸溶液；于样品管中加入 2,4-二硝基苯肼 0.5 ml，两管加盖置 37℃ 保温箱保温 3 小时；取出样品管放入冰水中，两管置冰浴中，从滴定管滴加 85% 硫酸 2 ml 于各管中并边滴边摇（防止溶液温度升高使糖炭化转黑）；各管于冰浴取出后置室温 30 分钟，立即在分光光度计 540 nm 波长处读取光密度，从标准曲线查得相应含量。

标准管与样品空白管操作同标准管，加入 85% 硫酸后溶液颜色会继续变深，必须在 30 分钟内完成比色；硫酸可防止抗坏血酸被氧化，最终溶液中硫酸浓度须一致，否则影响色度。