20 实验十八 食品中着色剂的测定.doc

第1页：着色剂测定原理与试剂

原理

聚酰胺是具有二极性的化合物，水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附，在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法或薄层色谱法分离后与标准比较定性、定量。

试剂：聚酰胺粉（尼龙 6）；硫酸 1:10；甲醇-甲酸溶液（6:4）；甲醇；20% 柠檬酸溶液；10% 钨酸钠溶液；石油醚（沸程 60-90℃）；海砂（先后以 1:10 盐酸、5% 氢氧化钠溶液煮沸 15 min 并水洗至中性，105℃ 干燥）；乙醇-氨溶液（1 毫升氨水加 70% 乙醇至 100 毫升）；50% 乙醇溶液；硅胶 G；pH 6 的水；盐酸 1:10；5% 氢氧化钠溶液；碎瓷片。

展开剂：a 正丁醇-无水乙醇-1% 氨水（6:2:3）、b 正丁醇-吡啶-1% 氨水（6:3:4）、c 甲乙酮-丙酮-水（7:3:3）供纸色谱用；d 甲醇-乙二胺-氨水（10:3:2）、e 甲醇-氨水-乙醇（5:1:10）、f 2.5% 柠檬酸钠-氨水-乙醇（8:1:2）供薄层色谱用。

第2页：样品处理与聚酰胺吸附分离

样品处理：果味水、果子露、汽水吸取 50.0 毫升（汽水需加热驱除二氧化碳）；配制酒吸取 100.0 毫升加碎瓷片加热驱除乙醇；硬糖、蜜饯类、淀粉软糖称取 5.0 或 10.0 克粉碎样品加 30 毫升水温热溶解，pH 较高时用 20% 柠檬酸调至 pH 4 左右；奶糖称取 10.0 克加 30 毫升乙醇-氨溶液溶解，水浴浓缩至约 20 毫升，用 1:10 硫酸调至微酸性再加 1.0 毫升硫酸与 1 毫升 10% 钨酸钠溶液沉淀蛋白质，过滤收集滤液；蛋糕类称取 10.0 克加海砂风干后加 30 毫升石油醚搅拌除脂三次，吹干研细后用乙醇-氨溶液提取色素。

吸附分离：将溶液加热至 70℃，加入 0.5-1.0 克聚酰胺粉充分搅拌，用 20% 柠檬酸调 pH 至 4 使色素完全被吸附（溶液仍有颜色可再加聚酰胺粉）。将吸附色素的聚酰胺转入 G3 垂熔漏斗或玻璃漏斗过滤，用 20% 柠檬酸酸化至 pH 4 的 70℃ 水反复洗涤每次 20 毫升；含天然色素时再用甲醇-甲酸溶液洗 1-3 次至洗液无色，再用 70℃ 水洗至流出液呈中性。然后用乙醇-氨溶液分次解吸全部色素，收集解吸液于水浴上驱氨；单色则用水稀释至 50 毫升用分光光度法测定，混合色素则浓缩至约 2 毫升后移入 5 毫升容量瓶用 50% 乙醇定容。

第3页：纸色谱与薄层色谱定性

纸色谱：取色谱用纸，在距底边 2 cm 的起始线上分别点 3-10 微升样品溶液与 1-2 微升色素标准溶液，挂于分别盛有 a、b、c、d、e、f 展开剂的层析缸中用上行法展开，待溶剂前沿展至 15 cm 处取出晾干，与标准斑比较定性。也可取 0.5 毫升样液在起始线从左到右点成条状、纸右边点标准溶液，依法展开晾干后先定性后定量；靛蓝在碱性条件下易褪色，可用 e 展开剂。

薄层色谱：称取 1.6 克聚酰胺粉、0.4 克可溶性淀粉及 2 克硅胶 G，加 15 毫升水研匀后立即置涂布器中铺成厚度 0.3 mm 的板，室温晾干后于 80℃ 干燥 1 小时，置干燥器中备用。在距板底边 2 cm 处将 0.5 毫升样液点成与底边平行的条状，右边点 2 微升色素标准溶液。苋菜红与胭脂红用 d 展开剂，靛蓝与亮蓝用 e 展开剂，柠檬黄与其他色素用 f 展开剂；取适量展开剂倒入展开槽，待色素明显分开后取出晾干，与标准斑比较，比移值相同即为同一色素。

第4页：色素定量与测定波长

样品测定：将纸色谱的条状色斑剪下，用少量热水洗涤数次，洗液移入 10 毫升比色管并加水稀释至刻度作比色用；薄层色谱的条状色斑连同扩散部分用刮刀刮下移入漏斗，用乙醇-氨溶液反复解吸至无色，收集解吸液于蒸发皿中水浴挥发除氨，移入 10 毫升比色管加水至刻度作比色用。

标准曲线：分别吸取 0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 ml 胭脂红、柠檬黄、日落黄色素标准使用液，或 0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml 亮蓝、靛蓝色素标准溶液，分别置于 10 ml 比色管中各加水稀释至刻度。样品与标准管分别用 1 cm 比色杯以零管调节零点，于一定波长下测定吸光度，绘制标准曲线或与标准色列目测比较。

计算：X = A × 100 / [m × (V2 / V1) × 1000]，式中 X 为样品中色素的含量（g/kg 或 g/L），A 为测定用样液中色素的含量（mg），m 为样品质量（体积，g 或 ml），V1 为样品解吸后总体积（ml），V2 为样液点板（纸）体积（ml）。

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