页数：30页文件大小：287.5 KB来源： 医学微生物学ppt课件
本课件先介绍病毒感染标本的采集时机、部位与冷藏速送原则，继而讲解形态学检查、病毒分离培养、抗原抗体检测与核酸杂交、PCR等分子生物学方法，并归纳疫苗预防、干扰素与化学药物的防治策略。
病毒感染的检查方法及防治原则：病毒感染的检查方法及防治原则
教学大纲熟悉病毒的防治原则：教学大纲熟悉病毒的防治原则了解病毒感染的检查方法
原则：尽早采取：病毒感染的检查方法临床确诊流行病学调查一、标本采集与送检：原则：尽早采取、部位适宜、冷藏速送：冰块或干冰、50%的甘油缓冲盐水、抗生素双份血清标本：急性期、恢复期双份血清
早期采集采取病程初期或急性期：1.早期采集采取病程初期或急性期的标本含病毒量多，易于检出；病程晚期机体已产生了抗体，病毒数量减少，检出率将显著降低2.由感染部位采集如呼吸道感染取鼻咽洗漱液或痰液；肠道感染取粪便；脑内感染取脑脊液(CSF)；发疹性疾病取疱疹内积液；有病毒血症者取血液
无菌操作：3.无菌操作无菌操作，对本身带有杂菌(如咽拭子、粪便)的标本，应使用抗生素。一般加青霉素、链霉素霉素(100μg/ml)4.标本应低温保存并尽快送检病毒在室温中易失去活性，故采取标本后应立即送实验室，如标本需较长时间运送，可用保温瓶(内放冰块和食盐，或固态二氧化碳和酒精)存放。
血清学诊断标本的采取应在发病：5.血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后各取1份血清，以便对比双份血清抗体效价的动态变化。血清抗体标本应保存在-20℃
光学显微镜大病毒或者检查包涵：（一）光学显微镜---大病毒或者检查包涵体（二）电子显微镜电镜和免疫电镜二、快速检查方法
检查病毒性抗原及抗体的方法：（三）检查病毒性抗原及抗体的方法1、检测抗原：近年来，采用标记技术，即用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶特异标记的抗体，检测标本中相应的抗原，此方法具有敏感、特异、快速等优点。
检测抗体：2、检测抗体：用病毒特异性抗原可以检测感染者血清中的IgM，检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染，特别是IgM抗体的存在对证实孕妇感染风疹病毒尤为重。另外，检测早期抗体可以快速诊断病原体.利用特异抗原检测IgG类抗体，则需早期和恢复期双份血清，且抗体效价4倍以上增高方有诊断意义。
检测病毒的核酸的方法利用：（四）检测病毒的核酸的方法利用病毒基因作为探针用核酸杂交的方法检测标本中有无相应的病毒核酸，进行疾病的诊断
核酸杂交技术双链在高温及碱性：1、核酸杂交技术双链DNA在高温及碱性溶液中，碱基对间的氢键被破坏，两链分开变成单链的过程叫变性；在中性盐溶液中，当温度慢慢冷却至室温时单链DNA又重新组合成双链的过程叫复性。核酸分子杂交技术的原理就是利用DNA可以变性、复性的特性，制成用同位素或非同位素标记的单链DNA片段基因探针与固定在硝酸纤维素膜上待测的变性DNA杂交，再用放射自显影技术或其他显色法来确定与探针DNA同源的DNA
核酸扩增法：2、核酸扩增法PCR，这一技术能使核酸在短时间内扩增百万倍而被检出。已被广泛应用于病毒性感染的诊断与研究中
对以测定基因核酸序列的病毒：对以测定基因核酸序列的病毒，设计相应的病毒基因的引物,作多聚酶链反应( PCR),通过扩增病毒基因片段可诊断标本中是否存在病毒核酸。检测病毒核酸的缺点是：核酸阳性不等于标本中有活病毒,不能检测不了解核酸序列的病毒
光镜包涵体电镜免疫荧光：光镜-----包涵体电镜免疫荧光ELISA分子生物学技术杂交Southern blotPCRNorthern blot
病毒的分离培养检验标本→杀灭：三、病毒的分离培养检验标本→杀灭杂菌(青链霉素)接种病毒分离的一般程序：动物接种→出现病状鸡胚接种→病变或死亡细胞培养→细胞病变鉴定病毒种型
常规分离与鉴定动物接种-：2、常规分离与鉴定动物接种-动物模型鸡胚接种组织培养器官培养移植培养细胞培养原代细胞培养二倍体细胞培养传代细胞培养三大培养方法
病毒在细胞内增殖的指标正常细胞病变细胞：病毒在细胞内增殖的指标正常细胞病变细胞
病毒感染的防治原则一.人工主动免疫：病毒感染的防治原则一.人工主动免疫：接种疫苗灭活疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗；合成肽疫苗、抗独特型疫苗；二.人工被动免疫：如，免疫血清，胎盘球蛋白，丙球，转移因子等。
灭活疫苗：灭活疫苗：乙脑疫苗狂犬疫苗流感灭活疫苗等减毒活疫苗：脊髓灰质炎疫苗麻疹疫苗腮腺炎疫苗风疹疫苗HAV疫苗其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗，亚单位疫苗等
人工被动免疫：人工被动免疫，常用制剂有：，①抗病毒免疫血清，现有抗麻疹、抗狂犬病、抗乙型脑炎免疫血清等，这些免疫血清具有显著的预防作用；②人免疫球蛋白制剂，包括人血清丙种球蛋白、胎盘球蛋白，③特异性免疫球蛋白
药物防治抗病毒治疗原则：三、药物防治抗病毒治疗原则：-抑制病毒复制；-增强机体免疫应答能力，促进消灭病毒感染的细胞；抗病毒药作用机理：①与病毒竞争细胞表面的受体，阻止病毒的吸附；②阻碍病毒穿入或脱壳；金刚烷安③阻碍病毒生物合成；④增强宿主抗病能力的物质；⑤中草药具有清热解毒功效，有抗病毒作用；如大青叶、板蓝根
抗病毒药物或制剂病毒为严格：抗病毒药物或制剂病毒为严格细胞内寄生性微生物，所以，抗病毒药物必须对病毒有选择性抑制作用而又不损伤宿主细胞或机体。从理论上讲，病毒复制的任何一个环节都可以是抗病毒药物发挥作用的靶位置，但是要区别病毒复制与宿主细胞的正常生理过程确实是很困难的
尽管近年来随着分子病毒学发展：尽管近年来随着分子病毒学发展而研制出许多抗病毒新药，但是，大多数抗病毒药物的应用都有一定的限制，甚至有时可对机体有毒性作用，也未被临床采用。对抑制病毒基因复制、转录及转译的药物和剂制是开发病毒药物的热点。目前常用的有以下几类：
核苷类似物：(一)核苷类似物，核苷类似物是最早用于临床的抗病毒药物，他是用合成的异常嘧啶取代病毒DNA前体的胸腺嘧啶，通过使异常嘧啶掺入到子代DNA中，阻抑子代病毒基因的合成与表达，从而抑制病毒的复制或复制出的病毒失去感染性1碘尿苷（IDU，疱疹净）用于治疗眼疱疹病毒感染。除可作用于病毒DNA，同时也掺入细胞的DNA组织，具有一定的毒性
无环鸟苷：2.无环鸟苷（ACV，阿昔洛韦)和丙氧鸟苷(DHPG)，是新一代核苷类似物。由于正常细胞中无无环鸟苷。因此，仅在有病毒感染的细胞中发挥抗病毒作用，对病毒具有选择性，对宿主细胞毒性很小，主要用于疱疹病毒感染引起的单纯疱疹、生殖器疱疹及带状疱疹。
病毒蛋白酶抑制物有些病毒本身：（二）病毒蛋白酶抑制物有些病毒本身除可编码病毒复制和转录后剪接、加工酶外，还可有降解大分子病毒蛋白的酶，因此根据病毒蛋白酶的结构进行设计并研制病毒蛋白酶抑制剂。在HIV中已设计出针对逆转录病酶及蛋白酶活性位点的抑制剂，其商品名为英迪纳瓦intonavir及瑞托纳瓦ritonavir。华裔美国科学家用3TC加蛋白酶抑制剂联合治疗HIV，被称为“鸡尾酒”治疗方案，可较长期抑制病毒复制，受到普遍重视
三其他干扰素和干扰素诱生剂：三其他干扰素和干扰素诱生剂以及细胞因子IL-12，TNF和一批中药等天然药物如黄芪、板蓝根、大青叶等也具有抑制病毒复制的作用。IFN治疗乙型及丙型肝炎也有效。中药对肠道病毒、呼吸道病毒、虫媒病毒、肝炎病毒感染有一定防治作用。
四抗病毒基因治疗选择病毒：四抗病毒基因治疗选择病毒基因组中的靶基因，然后设计互补的DNA序列片段，通过反义寡核苷酸与病毒关键基因结合后，可阻碍DNA的复制与RNA的转录。对RNA的反义寡核苷酸通过与靶基因mRNA互补结合后，阻碍病毒mRNA与核糖体结合而阻碍转译病毒蛋白等。这类抗病毒制剂主要问题是成本费高，制剂不稳定。迄今被批准用于临床的只有针对抗巨细胞病毒的反义核酸，局部用于巨细胞病毒感染的脉络膜和视网膜炎。
核苷类药物无环鸟苷：1、核苷类药物无环鸟苷(ACV)，叠氮胸苷(AZT)，碘苷(IDU，疱疹净)，病毒唑(三氮唑核苷)2、病毒蛋白酶抑制物沙喹那韦(saquinavir)，利托那韦(ritonavir)吲哚那韦(indinavir),奈非那韦(nelfinavir)3、IFN、IFN诱生剂、细胞因子、中草药4、基因治疗反义寡脱氧核酸(asODN)；反义寡核苷酸（asON，反义RNA）；核酶（ribozyme）
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