02-1 实验二 还原糖的测定(3,5-二硝基水杨酸法).pptx

第1页：实验二 还原糖和总糖的测定

实验二 还原糖和总糖的测定（3,5-二硝基水杨酸法）

第2页：实验二目的

• 掌握还原糖和总糖的测定原理。
• 学习还原糖和总糖的3,5-二硝基水杨酸（DNS）测定法。

第3页：还原糖的定义

单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。

第4页：DNS显色原理

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其他产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物在540nm处有最大吸收，在一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中还原糖的含量。

第5页：DNS反应颜色变化

3,5-二硝基水杨酸（DNS）本身为黄色，被还原糖还原后生成3-氨基-5-硝基水杨酸，呈棕红色。

第6页：实验二器材

• 材料：红薯。
• 试管：1.5cm×15cm（×10）、1.8cm×18cm（×2）。
• 吸管：1mL（×2）、10mL（×2）。
• 水浴锅、电炉。
• 722型分光光度计。
• pH试纸（1~14）。
• 容量瓶100mL（×3）。
• 量筒、研钵、三角烧瓶、玻璃漏斗。
• 电子天平。

第7页：实验二试剂

标准葡萄糖溶液（1.0mg/mL）

准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，溶于蒸馏水并定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂

将6.3g DNS和262mL 2mol/L NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，存储于棕色瓶中备用。

第8页：葡萄糖标准曲线制作

原文标签与数值行整体错位，且「0.60」处写作「0..60」；此处按1.0mg/mL标准液的加样逻辑还原为标准葡萄糖溶液0~1.0mL、蒸馏水互补至1.0mL，末行按含量（mg）列出。以吸光度为纵坐标、各标准液浓度为横坐标作图得标准曲线（比色皿中装2/3液体即可）。

第9页：标准曲线数据处理

用EXCEL作图、求R²和公式。

第10页：样品中还原糖提取

1. 准确称取0.2g面粉（或藕粉），加蒸馏水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入100mL三角烧瓶中，并用20mL蒸馏水冲洗研钵，洗出液一并转入。
2. 将三角烧瓶于50℃水浴中保温0.5h，不时搅拌，使还原糖浸出。
3. 将浸出液（含沉淀）转移到50mL离心管中，于4000r/min下离心5min。
4. 沉淀用20mL蒸馏水洗一次，再离心。
5. 将两次离心的上清液合并，用蒸馏水定容至100mL，混匀，即为还原糖待测液。
6. 取1mL进行还原糖的测定。

第11页：样品中总糖提取

1. 准确称取0.5g面粉（或藕粉），加蒸馏水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入100mL三角烧瓶中，并用15mL蒸馏水冲洗研钵，洗出液一并转入。
2. 加入6mol/L HCl溶液10mL，搅拌均匀后在沸水浴中水解0.5小时。
3. 取出1~2滴置于白瓷板上，加1滴I₂-KI溶液检查水解是否完成，如已水解完成则不显蓝色。
4. 水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6mol/L NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100mL。
5. 过滤取滤液10mL于100mL容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液。
6. 取1mL用于总糖测定。

第12页：离心配平注意事项

离心机使用时一定要等重配平：（离心管＋盖子＋内容物）＝（离心管＋盖子＋内容物），精确到小数点后2位。

第13页：样品含糖量测定表

第14页：还原糖与总糖含量计算

按照下列公式分别计算面粉中还原糖和总糖的百分含量：

ω＝（C₁V₁／m）×稀释倍数×100%

C₁

还原糖的质量浓度（mg/mL）。

V₁

样品中提取液的体积（mL）。

m

样品的质量（mg）。

第15页：

本页源文件未提取到文字内容，仅有图片（位于第14页含量计算公式之后）。建议对照原课件图片补充本页要点说明。