页数：31页文件大小：227.4 KB来源： 生物化学实验ppt课件
本课件为生物化学实验课程开篇，先说明学时安排、实验要求、实验室守则与成绩构成，随即进入实验一：以唾液淀粉酶与蔗糖酶对淀粉、蔗糖的催化作用为材料，阐明酶的专一性及其分型、淀粉与蔗糖结构差异、Benedict反应原理，并给出试剂配制与三组对照操作。
生物化学实验设两套学时方案，分别面向不同专业班级开设。
| 实验项目 | 学时 |
|---|---|
| 酶的底物专一性 | 4 |
| 总糖和还原糖的测定 | 4 |
| 蛋白质N端分析 | 4 |
| 植物DNA的提取 | 4 |
| DNA的酶切和电泳 | 4 |
| 酵母醇脱氢酶的提取和纯化 | 12 |
| SDS-PAGE测定蛋白质分子量 | 8 |
原文第三条序号标注为「2」，按排列顺序应为「3」，此处已作顺序修正。
| 实验项目 | 学时 |
|---|---|
| 酶的底物专一性 | 4 |
| 总糖和还原糖的测定 | 4 |
| 蛋白质N端分析 | 4 |
| 植物DNA的提取 | 4 |
| DNA的酶切和电泳 | 4 |
| 酵母醇脱氢酶的提取和纯化 | 12 |
| 亲和层析分离纯化蛋白质 | 14 |
| Western Blot鉴定目的蛋白 | 14 |
实验报告每人1份，下次实验课前交。
| 考核项目 | 分值 |
|---|---|
| 出勤和实验室综合表现 | 15分 |
| 实验报告 | 35分 |
| 实验课考试 | 50分 |
实验一 酶的底物专一性
本实验以唾液淀粉酶（内含淀粉酶及少量麦芽糖酶）、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的催化作用，观察淀粉酶、蔗糖酶的底物专一性。
原理：本实验原理由酶的专一性分型、淀粉与蔗糖的结构差异、Benedict反应三部分构成。
酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化作用。按专一性程度分为：
直链淀粉的相对分子质量比支链淀粉小，其分子由许多α-D-葡萄糖经过α-1,4-苷键反复连接而成，为线状聚合物。
直链淀粉并非伸展状态的直链，而是有规律地卷曲成螺旋状，每一螺旋圈约有6个葡萄糖结构单位。直链淀粉遇碘液显蓝色，加热煮沸时颜色消失，冷却后又重新显色，该反应很灵敏，常用来检验淀粉或碘的存在。
支链淀粉比直链淀粉由更多的D-葡萄糖组成。D-葡萄糖之间以α-1,4苷键连接成主链，每隔20~25个葡萄糖单位便分枝出1个支链，支链上还有分枝，支链的连接点即分枝处为α-1,6糖苷键。
支链淀粉呈分枝状结构：主链由α-1,4苷键连接，分支点以α-1,6糖苷键相连，形成多级分枝。
蔗糖是由α-葡萄糖和β-果糖以α-1,2糖苷键相连而成的双糖。
半缩醛羟基在右边，即与氧环同侧，为α-D-葡萄糖；半缩醛羟基在左边，即与氧环异侧，为β-D-葡萄糖。
试剂：本实验需自制冷冻或新鲜的酶液，并配制淀粉、蔗糖底物溶液与Benedict试剂。
本页源文件未提取到文字内容，仅有图片（位于第25页Benedict试剂配制与第27页实验步骤之间）。建议对照原课件图片补充本页要点说明。
实验步骤：分检查试剂、淀粉酶的专一性、蔗糖酶的专一性三组进行。
| 试剂 | 试管1 | 试管2 | 试管3 |
|---|---|---|---|
| 0.5%淀粉溶液（mL） | — | — | 3 |
| 2%蔗糖溶液（mL） | — | 3 | — |
| 蒸馏水（mL） | 3 | — | — |
| Benedict试剂（mL） | 2 | 2 | 2 |
| 处理 | 摇匀，沸水煮2分钟 | 摇匀，沸水煮2分钟 | 摇匀，沸水煮2分钟 |
| 观察 | 记录结果并分析原因 | 记录结果并分析原因 | 记录结果并分析原因 |
| 试剂 | 试管4 | 试管5 | 试管6 |
|---|---|---|---|
| 稀释的唾液淀粉酶（mL） | 1 | 1 | 1 |
| 0.5%淀粉溶液（mL） | — | — | 3 |
| 2%蔗糖溶液（mL） | — | 3 | — |
| 蒸馏水（mL） | 3 | — | — |
| 保温 | 摇匀，37℃保温30分钟 | 摇匀，37℃保温30分钟 | 摇匀，37℃保温30分钟 |
| Benedict试剂（mL） | 2 | 2 | 2 |
| 观察 | 沸水煮沸2分钟，记录结果并分析原因 | 沸水煮沸2分钟，记录结果并分析原因 | 沸水煮沸2分钟，记录结果并分析原因 |
| 试剂 | 试管7 | 试管8 | 试管9 |
|---|---|---|---|
| 蔗糖酶溶液（mL） | 1 | 1 | 1 |
| 0.5%淀粉溶液（mL） | — | — | 3 |
| 2%蔗糖溶液（mL） | — | 3 | — |
| 蒸馏水（mL） | 3 | — | — |
| 保温 | 摇匀，37℃保温15分钟 | 摇匀，37℃保温15分钟 | 摇匀，37℃保温15分钟 |
| Benedict试剂（mL） | 2 | 2 | 2 |
| 观察 | 沸水煮2分钟，记录结果并分析原因 | 沸水煮2分钟，记录结果并分析原因 | 沸水煮2分钟，记录结果并分析原因 |
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