18 弧菌科及检验.ppt

第1页：弧菌科常规检验

弧菌科常规检验：本章讲述弧菌科的种类、共同特征、各菌属鉴别试验以及霍乱弧菌等重要病原菌的微生物学检验。

第2页：弧菌科种类

弧菌科种类：弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属、发光菌属等。

第3页：弧菌科共同特征

• 革兰阴性菌
• 需氧、兼性厌氧
• 营养要求不高
• 氧化酶（＋）
• 发酵葡萄糖，产酸不产气

第4页：弧菌科三个菌属的鉴别试验

S为敏感，R为耐药；＋／－表示因菌种而异。

第5页：霍乱弧菌概述

概念

霍乱弧菌是引起烈性肠道传染病霍乱的病原体。

生物型

包括古典生物型和ElTor生物型。

新流行株

O139是新的流行菌株。

第6页：霍乱弧菌形态染色

形态与染色

革兰阴性，弧形或逗点状。

动力

单鞭毛，运动呈“穿梭样”或“流星样”。

特殊结构

无芽孢，无荚膜。

排列

在新鲜粪便中成“鱼群样”排列。

第7页：霍乱弧菌革兰染色与鞭毛染色

霍乱弧菌革兰染色、鞭毛染色：革兰染色可见染成红色的弧形或逗点状菌体，呈鱼群样排列；鞭毛染色可见菌体一端着生的单鞭毛。

第8页：霍乱弧菌培养特性

气体与营养

兼性厌氧，营养要求不高。

耐碱性

耐碱不耐酸，常用pH8.4～9.2的碱性培养基。

液体培养基

形成菌膜。

菌落特征

菌落圆形、较大、扁平。

第9页：霍乱弧菌常用培养基

• 碱性蛋白胨水
• 碱性琼脂平板
• 硫代硫酸钠-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）
• 庆大霉素琼脂平板（含亚碲酸钾）

第10页：霍乱弧菌生化反应

d表示反应结果因菌株而异。

第11页：霍乱弧菌生物型

分型

O1群霍乱弧菌分为古典生物型和ElTor生物型。

共同点

两种生物型具有相同的抗原结构，多数生物学性状相似。

第12页：霍乱弧菌两种生物型的鉴别

S为敏感，R为耐药。

第13页：霍乱弧菌分群与血清型

根据O抗原不同分为139个血清群，O1群包括古典生物型和ElTor生物型，其他群称为非O1群（非凝集弧菌）。下表列出O1群血清型。

第14页：抵抗力与变异

• ElTor型抵抗力较古典型强，在水中存活时间长
• 对酸性物质敏感
• 对庆大霉素耐受
• 多次传代可失去典型形态而成为杆状

第15页：霍乱弧菌临床意义

致病物质

霍乱肠毒素，导致小肠上皮细胞分泌功能亢进，分泌大量肠液。

所致疾病

经肠道传染，引起烈性肠道传染病——霍乱，为甲类传染病，典型病人粪便呈“米泔水”样。

免疫性

病后可获得牢固免疫，以SIgA为主。

流行株

我国霍乱流行菌株以ElTor小川型为主。

第16页：霍乱肠毒素作用机制示意图

霍乱肠毒素作用机制示意图：图示霍乱肠毒素B亚单位与小肠上皮细胞GM1受体结合，A亚单位进入细胞后激活腺苷酸环化酶，使细胞内cAMP升高，导致肠液大量分泌而引起剧烈水样腹泻。

本页源文件为示意图，具体分子过程描述建议对照原课件图示核实。

第17页：

第18页：霍乱弧菌标本采集

• 发病早期采集标本，以“米泔水”样便为主，及时送检
• 可用卡－布培养基保存
• 严密包装，专人送检

第19页：霍乱弧菌检验程序

霍乱弧菌检验程序：标本先作直接涂片动力与制动试验、快速诊断并发出初步报告；同时接种碱性蛋白胨水增菌，转种TCBS与碱性平板分离培养，挑取可疑菌落进行生化鉴定、分型与血清学鉴定后发出确诊报告。

第20页：显微镜检查

涂片染色

标本直接涂片革兰染色，注意形态、排列。

动力观察

压滴法或暗视野镜检，注意运动方式。

制动试验

O1诊断血清与菌体结合，动力消失。

第21页：霍乱弧菌分离培养

增菌

标本接种碱性蛋白胨水增菌6～8小时。

TCBS平板

出现黄色菌落（分解蔗糖）。

庆大霉素琼脂

出现中心灰褐色的菌落。

第22页：霍乱弧菌鉴定

生化反应

粘丝试验、霍乱红反应。

确定血清群

O1群诊断血清与可疑菌落作玻片凝集，以确定是否为O1群。

确定血清型

与分型诊断血清作玻片凝集，以确定血清型别。

确定生物型

第Ⅳ组噬菌体裂解试验、多粘菌素B敏感试验、鸡红细胞凝集试验、溶血试验。

第23页：副溶血性弧菌—生物学性状

形态染色

革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽孢，无荚膜。

嗜盐性

营养要求不高，嗜盐性，最适盐浓度3.5％NaCl，无盐培养基不生长。

菌落特征

TCBS上形成不发酵蔗糖的绿色菌落。

神奈川现象

（＋）：致病性副溶血性弧菌能溶解人或兔红细胞，不溶解马红细胞。

第24页：副溶血性弧菌—临床意义

致病物质

溶血素，包括耐热直接溶血素和耐热相关溶血素。

所致疾病

食入副溶血性弧菌污染的盐腌食品，引起食物中毒。

第25页：气单胞菌属—生物学性状

形态染色

革兰阴性杆菌，或球杆状、丝状，极端鞭毛，无芽孢。

生长条件

兼性厌氧；营养要求不高。

生长温度

生长温度较宽，0℃～45℃；嗜冷菌37℃以下生长，嗜温菌10～42℃生长。

第26页：气单胞菌属—生长现象与生化反应

生长现象

TCBS上不生长；血平板上为灰白、光滑、凸起菌落；肠道选择平板上形成不发酵乳糖菌落。

生化反应

氧化酶（＋）、触酶（＋）；发酵葡萄糖产酸产气；6.5％NaCl不生长；O129不敏感。

耐药性

多数菌株产β-内酰胺酶，对青霉素耐药。

第27页：气单胞菌属—临床意义

致病物质

溶血毒素、细胞毒素。

肠道感染

是夏季腹泻常见病原菌。

肠外感染

败血症、伤口感染等。

耐药性

多数菌株产β-内酰胺酶，对青霉素耐药。

第28页：气单胞菌属—检验程序

气单胞菌属检验程序：标本（血标本先增菌）接种血平板、Mac平板分离培养；挑取可疑菌落作涂片染色镜检，进行氧化酶、TCBS生长、O/129与耐盐试验等初步生化反应，再做全面生化反应和肠毒素测定后报告结果。

第29页：气单胞菌属—鉴定试验

• 与肠道杆菌、非发酵菌鉴别
• 与邻单胞菌属和弧菌属鉴别
• 气单胞菌属种间鉴别

第30页：肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别

第31页：气单胞菌属鉴定依据

形态与菌落

革兰阴性杆菌，丛鞭毛；肠道选择平板上无色透明菌落。

生化反应

氧化酶（＋）、葡萄糖发酵（＋）。

鉴别试验

O/129：R；TCBS：－；6.5％NaCl：－。

第32页：邻单胞菌属—主要性状

种类

只有一个菌种：类志贺邻单胞菌。

形态染色

革兰阴性杆菌，单鞭毛或丛鞭毛，无芽孢，无荚膜。

培养特性

兼性厌氧，营养要求不高；在SS平板上形成不发酵乳糖菌落。

生化反应

氧化酶（＋），葡萄糖发酵（＋）；O/129：S；TCBS：不生长；6.5％NaCl：不生长；赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸双水解均（＋）。

耐药性

多数菌株产β-内酰胺酶，对青霉素耐药。

第33页：邻单胞菌属—临床意义

肠道感染

腹泻、食物中毒，多见于夏季。

肠外感染

败血症、脑膜炎等，多见于免疫力低下者，感染率低，但死亡率高。

第34页：邻单胞菌属—检验程序

邻单胞菌属检验程序：标本（血标本先增菌）接种血平板、Mac平板分离培养；挑取可疑菌落作涂片染色镜检，进行氧化酶、TCBS生长、O/129与耐盐试验等初步生化反应，再做全面生化反应后报告结果。

第35页：邻单胞菌属—鉴定

与志贺菌属鉴别

氧化酶、动力、血清学。

与气单胞菌属鉴别

O/129、肌醇试验。

与弧菌属鉴别

TCBS生长、6.5％NaCl生长试验。