06 细菌形态学检查法.ppt

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本课件讲解细菌形态学检查技术。先介绍光学显微镜油镜的使用要点与不染色标本的压滴法、悬滴法、暗视野映光法；随后系统讲述染色标本检查，包括涂片干燥固定染色程序、复染法步骤、革兰染色的染液组成与操作时间、结果判定与染色原理；最后说明影响革兰染色的因素、抗酸染色与负染色等特殊染色方法。

显微镜检查要点页，说明使用光学显微镜油镜放大1000倍，香柏油折光率与玻片接近，用后须擦拭镜头

不染色标本检查页，说明其用于观察活菌动力与运动方式，常用压滴法、悬滴法与暗视野映光法

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第1页：细菌形态学检查

细菌形态学检查：本章讲述细菌的显微镜检查、不染色标本检查与染色标本检查，以及抗酸染色等特殊染色方法。

第2页：细菌的显微镜检查

显微镜: 光学显微镜。
放大倍数: 10×100＝1000。
所用镜头: 油镜头。
镜油: 香柏油或石蜡油；香柏油折光率（n＝1.515）与玻片折光率（n＝1.52）接近。
维护: 显微镜使用完毕须擦拭镜头。

第3页：不染色标本检查

应用: 主要用于观察活菌的动力和运动方式。
常用方法: 压滴法、悬滴法、暗视野映光法。

第4页：压滴法

压滴法：在载玻片上滴加细菌悬液，加盖玻片后于镜下观察活菌的动力。

第5页：悬滴法镜检

悬滴法镜检：将细菌悬液滴于盖玻片并倒置于凹玻片上，镜下观察活菌的运动方式。

第6页：染色标本的检查

单染法: 采用一种染料染色。
复染法（鉴别染色）: 采用两种或两种以上的不同染料先后染色，使不同种类细菌或同种细菌的不同结构染上不同颜色，便于鉴别。

第7页：染色标本检查的基本程序

基本程序: 涂片→干燥→固定→染色。
要点: 涂片方式、干燥方法、固定的方法与目的。
染料种类: 碱性染料、酸性染料、中性染料，碱性染料最常用。

第8页：复染法基本程序

复染法基本程序：初染→媒染→脱色→复染。

第9页：革兰染色法

革兰染色法的染液组成与染色方法
步骤	染液	时间
初染	结晶紫染液	1分钟
媒染	卢戈碘液	30s～1min
脱色	95％乙醇	关键步骤
复染	稀释复红	1分钟

影响革兰染色的关键步骤是脱色。

第10页：革兰染色结果

紫色: 革兰阳性菌。
红色: 革兰阴性菌。

第11页：革兰染色结果图

革兰染色结果图：左侧为染成紫色的革兰阳性菌，右侧为染成红色的革兰阴性菌。

第12页：革兰染色原理

渗透学说: 与肽聚糖结构有关。
化学学说: 与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关。
等电点学说: 与细菌所带电荷有关。

第13页：革兰染色意义

有助于鉴别细菌
有助于选择用药
有助于了解细菌的致病性

第14页：影响革兰染色的因素

操作因素: 涂片的厚薄、脱色时间的长短。
染液因素: 卢戈碘液放置时间过长、95％乙醇挥发、结晶紫与草酸铵混合时间太长。
细菌因素: 细菌种类、细菌菌龄。

第15页：抗酸染色

抗酸染色：用于区别抗酸菌与非抗酸菌。

第16页：细菌特殊染色

细菌特殊染色：本节介绍用于显示细菌荚膜、鞭毛、芽胞等特殊结构的染色方法。

第17页：负染色法

负染色法：使背景着色而菌体不着色，借此显示细菌荚膜等不易着色的结构。