第1页：常用细菌生化反应试验
常用细菌生化反应试验：本章讲述糖醇类代谢试验、蛋白质类代谢试验以及血清学试验的原理与判读。
第2页：糖醇类代谢试验
- 糖发酵试验
- 甲基红试验
- V-P试验
- 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验）
- 七叶苷水解试验
- β－半乳糖苷渗透酶试验
第3页：糖发酵试验
- 原理
- 多糖→单糖→丙酮酸→酸性产物（或产酸产气）→pH↓→指示剂呈酸性变色（产气者可见气泡）。
- 培养基
- 糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管。
- 试剂
- 酚红、溴甲酚紫等。
- 结果
- 培养基呈酸性变色。
- 应用
- 观察细菌对糖的分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定。
第4页：糖发酵试验结果判断
糖发酵试验结果判断| 反应现象 | 结果描述 |
|---|
| 酸性变色、有气泡 | 分解××糖产酸、产气 |
|---|
| 酸性变色、无气泡 | 分解××糖产酸、不产气 |
|---|
| 培养基不变色 | 不分解××糖 |
|---|
第5页：甲基红试验
- 原理
- 细菌分解糖产生丙酮酸，进一步生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4以下，加入甲基红后呈红色，为甲基红试验阳性。
- 培养基
- 葡萄糖蛋白胨水。
- 试剂
- 甲基红试剂。
- 结果
- 培养基呈现红色为＋，不变色为－。
- 应用
- 肠道杆菌常用生化反应，主要用于区别大肠埃希菌和产气肠杆菌。
第6页：伏－普试验
- 原理
- 细菌发酵葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。
- 培养基
- 葡萄糖蛋白胨水。
- 结果
- 加入试剂后培养基呈现红色为＋，不变色为－。
- 应用
- 肠道杆菌常用生化反应，主要用于区别大肠埃希菌和产气肠杆菌。
第7页：甲基红试验原理
甲基红试验原理：葡萄糖→丙酮酸→大量混合酸（pH降至4.4以下）→加甲基红试剂→培养基变红。
第8页：V－P试验原理
V－P试验原理：葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→二乙酰→加V-P试剂→培养基变红。
第9页：葡萄糖发酵的两条代谢途径
葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径| 代谢途径 | 中间产物 | 试剂与结果 |
|---|
| 混合酸途径 | 大量混合酸，pH降至4.4以下 | 加甲基红试剂，培养基变红（甲基红试验） |
|---|
| 丁二醇途径 | 乙酰甲基甲醇→二乙酰 | 加V-P试剂，培养基变红（V-P试验） |
|---|
第10页：蛋白质类代谢试验
第11页：靛基质试验
- 原理
- 细菌产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸生成靛基质（吲哚），与对二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰靛基质。
- 培养基
- 蛋白胨水。
- 试剂
- 靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）。
- 结果
- 培养基出现红色液面为＋，液面为黄色为－。
- 应用
- 用于肠道杆菌的鉴定。
第12页：靛基质试验原理
靛基质试验原理：色氨酸→（色氨酸酶）→靛基质（吲哚）→（对二甲基氨基苯甲醛）→玫瑰靛基质（玫瑰吲哚）。
第13页：硫化氢试验
- 原理
- 细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合生成黑色络合物。
- 培养基
- 含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基。
- 结果
- 培养基变黑为阳性，不变黑为阴性。
- 应用
- 常用于肠道杆菌的鉴定。
第14页：苯丙氨酸脱氨试验
- 原理
- 细菌的苯丙氨酸脱氨酶使培养基中的苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，后者与三氯化铁作用形成绿色化合物。
- 培养基
- 苯丙氨酸琼脂。
- 试剂
- 10％三氯化铁。
- 结果
- 加入试剂后培养基呈现绿色为阳性。
- 应用
- 多用于肠道杆菌的鉴定。
第15页：苯丙氨酸脱氨试验原理
苯丙氨酸脱氨试验原理：苯丙氨酸→（苯丙氨酸脱氨酶）→苯丙酮酸→（10％三氯化铁）→绿色化合物。
第16页：尿素酶试验
- 原理
- 产生脲酶的细菌水解尿素生成氨和CO₂，氨使培养基呈碱性变色。
- 培养基
- 尿素培养基。
- 试剂
- 酚红指示剂。
- 结果
- 培养基变红为＋，不变色为－。
- 应用
- 肠杆菌科属间鉴定。
第17页：尿素酶试验原理
尿素酶试验原理：尿素→（尿素酶）→氨＋CO₂→培养基pH升高→酚红呈碱性变色。
第18页：枸橼酸盐利用试验
- 原理
- 某些细菌能利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一碳源，也能利用铵盐作为唯一氮源，分解后产生碳酸盐和氨使培养基变碱，指示剂呈碱性反应。
- 培养基
- 枸橼酸盐培养基。
- 试剂
- 溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上呈蓝色）。
- 结果
- 培养基变蓝为＋，不变色为－。
- 应用
- 肠杆菌科属间鉴别。
第19页：枸橼酸盐利用试验原理
枸橼酸盐利用试验原理：枸橼酸盐＋铵盐→碳酸盐＋氨→培养基pH升高→溴麝香草酚蓝呈碱性变色（培养基变蓝）。
第20页：糖发酵试验
糖发酵试验：图示发酵管培养基呈酸性变色及倒管内出现气泡的产酸产气结果，与不变色的阴性管对照。
第21页：甲基红试验
甲基红试验：图示加入甲基红试剂后阳性管呈红色、阴性管不变色的结果对比。
第22页：靛基质试验
靛基质试验：图示加入靛基质试剂后阳性管液面出现玫瑰红色、阴性管液面呈黄色。
第23页：血清学试验
- 血清学鉴定
- 用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原。
- 血清学诊断
- 用已知抗原检测血清中的特异性抗体。
第24页：血清学鉴定
- 试剂
- 诊断血清（含抗体）。
- 检测对象
- 特异性抗原。
- 方法
- 直接凝集试验（玻片法）、荚膜肿胀试验。
- 示例
- 伤寒杆菌诊断血清＋待检测细菌出现凝集，玻片凝集试验阳性，报告检出伤寒杆菌。
第25页：血清学诊断
- 试剂
- 含已知抗原。
- 应用
- 检测待检者血清中有无相应的抗体以及抗体的效价。
