第1页：细菌的培养与分离技术
细菌的培养与分离技术：本章讲述培养基的制备、细菌的接种与培养方法，以及细菌在不同培养基中的生长现象。
第2页：培养基
- 常用玻璃器材的准备
- 培养基的成分和作用
- 培养基的种类
- 培养基的制备
第3页：常用玻璃器材的准备
- 新购置的玻璃器材
- 1％～2％盐酸浸泡→清水清洗。
- 用过的无污染器皿
- 洗涤剂洗刷→清水清洗；细菌污染的器材消毒灭菌后再洗刷。
- 盛培养基试管和平皿
- 高压灭菌→趁热倒出→洗涤剂洗刷→清水冲洗。
- 吸管
- 3％来苏浸泡→清水冲洗。
- 玻片和盖玻片
- 3％来苏和清洁液浸泡→清水冲洗；染色后的玻片应肥皂水煮沸10min再洗涤。
- 含油脂的器皿
- 单独灭菌。
第4页：玻璃器皿灭菌前的准备
玻璃器皿灭菌前的准备：玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的包裹和加塞后才能进行灭菌处理。
第5页：培养基的成分和作用
- 培养基
- 人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。
- 营养物质
- 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类。
- 水
- 溶剂，参与代谢。
- 凝固剂
- 琼脂、明胶。
- 抑制剂与指示剂
- 用于选择抑菌与结果判读。
第6页：培养基的种类（按用途）
- 基础培养基
- 培养营养要求不高的细菌，如普通平板。
- 营养培养基
- 满足营养需求较高细菌的生长，如血平板。
- 鉴别培养基
- 含特定底物用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA）。
- 选择培养基
- 具有选择性抑制作用，如SS平板。
- 增菌培养基
- 促进目的菌生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。
- 厌氧培养基
- 用于培养厌氧菌。
第7页：培养基的种类（按物理性状）
培养基按物理性状分类| 类型 | 琼脂含量 | 用途 |
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| 液体培养基 | 不含凝固剂 | 用于增菌和接种纯种细菌 |
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| 半固体培养基 | 0.3％～0.5％ | 用于观察细菌的动力 |
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| 固体培养基 | 2％～2.5％ | 多用于细菌的分离培养 |
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第8页：培养基制备的一般程序
- 一般程序
- 调配→溶化→矫正pH→过滤澄清→分装→灭菌→检定。
- 基础培养基
- 121℃高压蒸汽灭菌15分钟。
- 含糖培养基
- 113℃灭菌15分钟。
- 鸡蛋、血清培养基
- 间歇灭菌3天3次。
- 不耐高温的液体成分
- 滤过除菌。
第9页：培养基pH测定及矫正材料
- 待测培养基、pH7.4标准比色管、4孔比色架
- 0.02％酚红指示剂
- 氢氧化钠（0.1mol/L、1mol/L）、盐酸（0.1mol/L、1mol/L）、蒸馏水
- 试管（与比色管口径一致）
- 刻度吸管（5ml、1ml、0.5ml、0.25ml）
第10页：pH矫正的比色操作
pH矫正：在比色架中并列放置标准比色管与待测管，各加培养基、蒸馏水与酚红指示剂，目视比色判断待测培养基的偏酸或偏碱。
第11页：pH矫正结果判断
- 过酸
- 待测管颜色偏黄，需用碱液矫正。
- 相同
- 待测管与标准比色管颜色一致，pH已合格。
- 过碱
- 待测管颜色偏红，需用酸液矫正。
第12页：pH矫正的加碱量计算
计算：假设2ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol/L NaOH 0.12ml，现有培养基1000ml，求需加NaOH的量。
设需加NaOH的量为Xml，2∶1000＝0.12∶X，X＝0.12×1000÷2＝60ml（0.1mol/L NaOH）；60÷10＝6ml（1mol/L NaOH）。
第13页：细菌的接种与培养
- 无菌技术
- 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行，使用前后需进行消毒；检验使用的物品使用前后需严格灭菌。
- 相关要求
- 标本的采集、无菌试管与烧瓶的使用均须遵循无菌操作。
第14页：细菌接种的基本程序
- 基本程序
- 灭菌接种环→沾取标本→接种→灭菌接种环。
- 接种前灭菌
- 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本。
- 接种后灭菌
- 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境。
第15页：细菌接种法
- 平板划线接种法
- 使混合的细菌单个分散生长形成单个菌落以获得纯菌；分区划线法适用于含菌量较多的标本，连续划线法适用于含菌量较少的标本。
- 液体培养基接种法
- 用于增菌培养。
- 穿刺接种法
- 用于观察细菌动力。
- 斜面接种法
- 用于菌种保存与增菌。
- 倾注培养法
- 用于细菌计数。
第16页：分区划线法
分区划线法：第一区划线→灭菌接种环→第二区划线→灭菌接种环→第三区划线→灭菌接种环，逐步稀释以获得单个菌落。
第17页：连续划线法
连续划线法：接种环在平板表面作连续不断的划线，适用于含菌量较少的标本。
第18页：细菌培养法
- 一般培养（需氧培养）
- 培养温度35℃（恒温培养箱），培养时间18～24h。
- 二氧化碳培养法
- 烛缸法、二氧化碳培养箱。
- 厌氧培养法
- 厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等。
第19页：细菌在固体培养基中的生长现象
- 菌落
- 单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团；特征包括大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性；类型有光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）。
- 菌苔
- 多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
第20页：细菌在液体培养基中的生长现象
- 混浊
- 细菌均匀分散生长使液体浑浊。
- 沉淀
- 多见于链状排列的细菌。
- 菌膜
- 多见于厌氧菌。
第21页：细菌在半固体培养基中的生长现象
- 有鞭毛细菌
- 沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。
- 无鞭毛细菌
- 只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。
第22页：
第23页：菌落与菌苔
菌落与菌苔：图示平板上单个分散的菌落与多个菌落融合形成的菌苔。
第24页：细菌在液体培养基中的生长现象
细菌在液体培养基中的生长现象：图示混浊生长、沉淀生长与表面菌膜生长三种情形。
第25页：细菌在半固体培养基中的生长现象
细菌在半固体培养基中的生长现象：左为有动力现象（穿刺线边缘模糊），右为无动力现象（仅沿穿刺线生长）。
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